納米免疫磁珠高效富集單核增生李斯特菌.pdf

1、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes，LM)是一種人畜共患的食源性致病菌。該菌在3-45℃均能正常生長(zhǎng)繁殖，使其成為冷藏食品中主要的病原菌之一。感染LM后能引起李斯特菌病，嚴(yán)重威脅人類身體健康和社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。因此建立一種快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法具有重要意義。目前對(duì)于致病菌的檢測(cè)，一般需要較復(fù)雜的樣本處理及長(zhǎng)時(shí)間的預(yù)增菌，來(lái)達(dá)到方法的檢測(cè)靈敏度。本研究旨在建立一種快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)的單增李斯特氏菌納米免

2、疫磁珠富集方法，以期簡(jiǎn)化樣本處理方式及縮短增菌步驟。
　　 研究以甲醛滅活破碎后的LM菌體免疫日本大耳兔，制備獲得多克隆抗體?？贵w純化后，偶聯(lián)羧基化的磁珠制備抗LM免疫磁珠。采用粒度分析儀和透射電子顯微鏡分別對(duì)偶聯(lián)抗體前后磁珠粒徑大小和表面形貌進(jìn)行表征。比較了直接化學(xué)偶聯(lián)和鏈霉親和素-生物素系統(tǒng)兩種偶聯(lián)方法以及免疫磁珠的不同粒徑(180 nm，350 nm，1150 nm)對(duì)單增李斯特菌捕獲效率的影響。分別對(duì)免疫磁珠添加量、孵育

3、時(shí)間、磁分離時(shí)間等進(jìn)行了優(yōu)化，選擇較優(yōu)條件制備出高捕獲率的免疫磁珠，應(yīng)用于純培養(yǎng)液以及牛奶中的單增李斯特菌的捕獲，對(duì)照選擇性平板計(jì)數(shù)法，鑒定所制備的免疫磁珠捕獲單增李斯特菌的能力以及特異性。
　　 結(jié)果表明:獲得的單增李斯特菌多克隆抗體的效價(jià)為640000，該多抗與單增李斯特菌菌體有較好的結(jié)合，特異性好。鏈霉親和素-生物素偶聯(lián)法的捕獲效率約是直接偶聯(lián)法的3倍;同時(shí)，粒徑180 nm的磁珠捕獲效率明顯高于另外兩種粒徑磁珠。根據(jù)實(shí)驗(yàn)