納米磁珠對(duì)單增李斯特菌低場(chǎng)磁共振檢測(cè)的影響研究.pdf

1、食源性疾病是指通過(guò)攝食而進(jìn)入人體的有毒有害物質(zhì)（包括生物性病原體）等致病因子所造成的疾病。一般可分為感染性和中毒性。近年來(lái)，食源性疾患的發(fā)病率居各類(lèi)疾病總發(fā)病率的前列，是當(dāng)前世界上最突出的衛(wèi)生問(wèn)題。
　　近年來(lái)，隨著磁性納米技術(shù)的不斷發(fā)展，磁性納米材料以其獨(dú)特的理化性質(zhì)，在各個(gè)領(lǐng)域都有著非常廣泛地應(yīng)用，如定向載藥、生物分子的分離與富集、疾病的臨床治療與診斷、各種生物分子的檢測(cè)以及生物傳感器等方面。
　　單增李斯特菌（List

2、eria monocytogenes）是全世界普遍公認(rèn)一種重要的人畜共患食源性致病菌，其廣泛存在于各種乳制品、蔬菜、肉類(lèi)等食品中，特別是即食食品中，對(duì)人的健康安全造成了極大的威脅。人類(lèi)受感染后可導(dǎo)致胃腸炎、敗血癥、腦膜炎、流產(chǎn)，尤其是孕婦、嬰兒、老年人及免疫力低下者更易感染。
　　本論文采用生物功能化磁性納米粒子與低場(chǎng)磁共振技術(shù)結(jié)合而建立了一種單增李斯特菌的快速檢測(cè)方法，探究不同納米材料的低場(chǎng)磁共振技術(shù)在單增李斯特菌快速檢測(cè)中的影

3、響。第一部分成功合成了生物功能化的磁性納米材料。首先通過(guò)高溫?zé)峤夥ê铣闪擞腿苄訤e/Fe3O4和Fe3O4磁性納米粒子，F(xiàn)e/Fe3O4磁性納米粒子粒徑約為12.22nm，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子粒徑約為11.29nm。其次利用反相微乳液法對(duì)磁性納米粒子進(jìn)行表面修飾，制備出二氧化硅包裹，修飾氨基的Fe/Fe3O4和Fe3O4磁性納米粒子，修飾之后，納米粒子粒徑均一、生物相容性好。接著使用EDC·HCL和NHS活化已經(jīng)氨基功能化的Fe/Fe

4、3O4和Fe3O4，從而制備得到特異性免疫化的納米材料。第二部分探究了納米磁珠對(duì)單增李斯特菌低場(chǎng)磁共振檢測(cè)的影響。首先優(yōu)化單增李斯特菌的培養(yǎng)條件，單增李斯特菌在李斯特氏菌增菌肉湯中生長(zhǎng)最迅速、旺盛。其次使用不同納米材料成功構(gòu)建了一種單增李斯特菌的快速、靈敏檢測(cè)方法，靶標(biāo)菌可以與免疫功能化磁珠的抗體特異性結(jié)合，引起實(shí)驗(yàn)體系中橫向弛豫時(shí)間(T2)的變化，NMR可以敏感的檢測(cè)到這一變化。接著研究不同納米材料在低場(chǎng)磁共振檢測(cè)方法的影響，不同納米

5、材料都對(duì)靶標(biāo)菌(L.monocytogenes)有很強(qiáng)的特異性。經(jīng)比較實(shí)驗(yàn)，生物功能化的Fe/Fe3O4納米粒子和Fe3O4納米粒子進(jìn)行核磁共振實(shí)驗(yàn)時(shí)最優(yōu)穩(wěn)定劑都為2％脫脂牛奶;反應(yīng)時(shí)，F(xiàn)e/Fe3O4納米粒子的最優(yōu)濃度為0.16mg/mL，F(xiàn)e3O4納米粒子的反應(yīng)最適濃度為0.2mg/mL; Fe/Fe3O4納米粒子的最佳孵育時(shí)間為30min，而Fe3O4納米粒子的最佳孵育時(shí)間為40min，前者所用時(shí)間稍短;不同的納米材料，快速檢測(cè)單

6、增李斯特菌的線(xiàn)性檢測(cè)范圍均為1～103CFU/mL，檢測(cè)范圍一致，表明檢測(cè)的靈敏度與納米材料本身并沒(méi)有很大關(guān)聯(lián)。不同的納米材料用于實(shí)際樣品的檢測(cè)均顯示該檢測(cè)方法可以應(yīng)用于食品樣品的檢測(cè)并對(duì)于L.monocytogenes有很強(qiáng)的特異性。所以經(jīng)比較可知不同納米材料在低場(chǎng)磁共振技術(shù)快速檢測(cè)L.monocytogenes中效果相似，在各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)參數(shù)中并沒(méi)有很大差別。
　　本文構(gòu)建了一種特異性強(qiáng)的單增李斯特菌快速檢測(cè)方法，并且探究納米磁珠對(duì)