腰果殼油中銀杏酸的分離純化及其滅螺活性研究.pdf

1、血吸蟲(chóng)病是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康、影響經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)進(jìn)步的重大傳染病。殺滅釘螺是預(yù)防和控制血吸蟲(chóng)病的關(guān)鍵措施之一。氯硝柳胺是世界衛(wèi)生組織(WHO)唯一推薦使用的化學(xué)滅螺藥物，滅螺效果好，但成本較高，且對(duì)水生生物有較大的毒性，所以，開(kāi)發(fā)高效、低毒和價(jià)廉的植物源滅螺藥成為化學(xué)、制藥等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。腰果殼油資源十分豐富，已研究發(fā)現(xiàn)腰果殼油具有多種生物活性，包括抗腫瘤、抗菌、抗氧化、抗蟲(chóng)媒活性等。但有關(guān)腰果殼油中銀杏酸對(duì)水陸兩棲類(lèi)釘螺——日

2、本釘螺的滅螺活性研究、魚(yú)類(lèi)急性毒性、自然降解及其劑型的研究國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本論文以腰果殼油為原料，研究腰果殼油中銀杏酸的分離純化、改性及其滅螺活性，對(duì)腰果殼油中銀杏酸的自然降解和腰果殼油-β-環(huán)糊精包合物的制備進(jìn)行初步研究，為滅螺藥物的研究開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)，為腰果殼油的開(kāi)發(fā)利用提供新途徑。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　 研究腰果殼油中銀杏酸的分析、分離純化及其鈉鹽的制備。用薄層色譜法對(duì)腰果殼油中的銀杏酸進(jìn)行定性分析，用液

3、質(zhì)聯(lián)用儀作進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)鑒定，用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果表明，以石油醚(30～60℃)-乙醚-甲酸(70:30:1，V/V/V)為展開(kāi)劑，銀杏酸的Rf值為0.60。對(duì)銀杏酸混合物進(jìn)行了LC/DAD/ESI/MS結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果表明，銀杏酸混合物中主要有3種銀杏酸同系物單體，分別為C15∶3、C15∶2和C15∶1，此外還有少量的C17∶3、C17∶1和C15∶0。HPLC分析條件：色譜柱Chromspher5 C18(250mm×4

4、.6mm，5μm)，流動(dòng)相甲醇-3％HAC水溶液(89∶11，V/V)，流速1.0mL·min-1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)310nm，柱溫40℃。回歸曲線為Y=-449642.45241+3265600X，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，線性檢測(cè)范圍為3.879～19.375μg。采用外標(biāo)曲線法對(duì)純化前后腰果殼油中的銀杏酸含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，腰果殼油原料液中的銀杏酸含量為69.48%，經(jīng)硅膠柱純化后，含量提高到89.32%。分別使用鈣鹽法和硅膠柱層

5、析法對(duì)腰果殼油中的銀杏酸進(jìn)行純化。結(jié)果表明，前者成本較低，但純化效果較差，其含量只從69.48%提高到81.15%：后者純化效果較好，其含量從69.48%提高到89.32%，但成本較高。通過(guò)添加一定量氫氧化鈉制備銀杏酸鈉鹽，由其紫外掃描圖可以看出，當(dāng)氫氧化鈉與銀杏酸混合物的摩爾比為1∶0.75時(shí)，吸光度最大，表明此時(shí)生成的鈉鹽最多。故選擇1∶0.75為銀杏酸鈉鹽制備的摩爾比。由紅外光譜掃描結(jié)果可知，銀杏酸混合物中羧酸根官能團(tuán)的非對(duì)稱伸縮

6、振動(dòng)吸收峰和對(duì)稱伸縮振動(dòng)吸收峰分別是1648cm-1和1448cm-1，鈉鹽的分別是1589cm-1和1471cm-1，由此可知鈉鹽的羧酸根特征吸收峰波數(shù)發(fā)生了移動(dòng)，表明可能生成了銀杏酸鈉鹽。
　　 腰果殼油、銀杏酸混合物和銀杏酸鈉鹽的滅螺活性研究。按WHO“殺螺劑實(shí)驗(yàn)室終篩方法”測(cè)定樣品的滅螺活性。結(jié)果表明，腰果殼油、銀杏酸混合物和銀杏酸鈉鹽藥液48h時(shí)對(duì)釘螺的LC50分別為0.831、0.523和0.364mg/L，LC90

7、分別為2.180、1.439和2.360mg/L,腰果殼油、銀杏酸混合物和銀杏酸鈉鹽藥液濃度為2mg/L時(shí)，釘螺上爬率分別為16.7%、13.3%和13.3%；濃度超過(guò)4mg/L時(shí)，釘螺上爬率為0。由此可見(jiàn)腰果殼油、銀杏酸混合物和銀杏酸鈉鹽均具有較好的滅螺效果，其中銀杏酸混合物的滅螺效果明顯優(yōu)于腰果殼油，銀杏酸鈉鹽配制滅螺藥液時(shí)不需使用助溶劑，工藝更為簡(jiǎn)便，經(jīng)濟(jì)。
　　 研究腰果殼油、銀杏酸混合物和銀杏酸鈉鹽對(duì)魚(yú)苗的急性毒性。觀

8、察腰果殼油、銀杏酸混合物和銀杏酸鈉鹽藥液對(duì)紅鯉魚(yú)苗和鯽魚(yú)苗的急性毒性。結(jié)果表明，腰果殼油、銀杏酸混合物和銀杏酸鈉鹽藥液48h對(duì)紅鯉魚(yú)的LC50分別為1.738、1.208和1.408mg/L:對(duì)鯉魚(yú)的LC50分別為2.041、1.589和1.764mg/L。說(shuō)明腰果殼油、銀杏酸混合物和銀杏酸鈉鹽藥液對(duì)鯽魚(yú)的急性毒性比紅鯉魚(yú)的小，根據(jù)48 h的LC50進(jìn)行毒性分級(jí)，腰果殼油、銀杏酸混合物和銀杏酸鈉鹽對(duì)兩種魚(yú)苗的毒性均屬中等。
　　

9、 對(duì)腰果殼油中銀杏酸的自然降解進(jìn)行初步研究。對(duì)腰果殼油中銀杏酸進(jìn)行室內(nèi)避光保存實(shí)驗(yàn)、紫外光和太陽(yáng)光光解實(shí)驗(yàn)。由紫外掃描圖可知，腰果殼油中銀杏酸溶液在室內(nèi)避光條件下保存較穩(wěn)定，在254、365nm紫外光照射下幾乎沒(méi)有變化，太陽(yáng)光照射下，第一天在220nm處產(chǎn)生負(fù)峰，第二天后變?yōu)殂y杏酸吸收峰，并且強(qiáng)度逐漸增大，其原因有待進(jìn)一步研究。
　　 研究腰果殼油-β-環(huán)糊精包合物的制備。采用飽和水溶液法制備腰果殼油-β-環(huán)糊精包合物，單因素試

10、驗(yàn)和正交試驗(yàn)結(jié)果均表明，最佳條件為腰果殼油與β-CD投料比1∶2、包合溫度50℃、包合時(shí)間4h;電鏡掃描考察表明，包合物為長(zhǎng)方體形晶體，與β-環(huán)糊精有明顯區(qū)別；對(duì)β-CD、腰果殼油、β-CD與腰果殼油混合物和腰果殼油-β-CD包合物的紅外光譜分析可知，包合物中羧酸根官能團(tuán)的非對(duì)稱伸縮振動(dòng)吸收峰和對(duì)稱伸縮振動(dòng)吸收峰分別是1648cm-1和1453cm-1，且苯環(huán)的特征振動(dòng)吸收峰分別是1604cm-1、1338cm-1和1304cm-1，苯