燈盞花素誘導(dǎo)血管化口腔黏膜的組織工程構(gòu)建.pdf

1、組織工程構(gòu)建物血管化是制約組織工程構(gòu)建物進(jìn)入臨床的關(guān)鍵問(wèn)題之一，血管化的目的是建立宿主和組織工程構(gòu)建物的血液流通，提高細(xì)胞的生存能力。鑒于血管化與組織工程構(gòu)建物的密切關(guān)系，本研究運(yùn)用燈盞花素進(jìn)行促進(jìn)組織工程化口腔黏膜構(gòu)建物血管化分析，并明確燈盞花素在促進(jìn)血管化過(guò)程中的可能機(jī)制，尋找新的簡(jiǎn)便、高效具有較好臨床應(yīng)用前景的促血管化方法。 研究目的： 1.優(yōu)化口腔黏膜細(xì)胞培養(yǎng)方法，為組織工程構(gòu)建提供所需的種子細(xì)胞；比較聚羥基乙酸

2、、醫(yī)用膠原膜、瑞諾組織補(bǔ)片構(gòu)建組織工程化口腔黏膜的優(yōu)劣； 2.比較研究不同濃度燈盞花素對(duì)聚羥基乙酸和醫(yī)用膠原膜血管化的不同影響； 3.探討并比較不同濃度燈盞花素促組織工程化口腔黏膜構(gòu)建物血管生成的作用機(jī)制。 研究方法： 1.選擇正常人口腔黏膜，通過(guò)二次酶消化法和組織塊培養(yǎng)法法獲取種子細(xì)胞，與不同支架材料復(fù)合培養(yǎng)組織工程化口腔黏膜。通過(guò)組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)觀(guān)察并比較種子細(xì)胞和組織工程化口腔黏膜構(gòu)建物。

3、 2.分別通過(guò)Masson三色染色、免疫組織化學(xué)染色和RT-PCR方法，檢測(cè)不同濃度燈盞花素對(duì)聚羥基乙酸和醫(yī)用膠原膜血管化的影響。 3.通過(guò)CD31免疫組織化學(xué)染色和VEGF的RT-PCR方法，檢測(cè)不同濃度燈盞花素對(duì)組織工程化口腔黏膜構(gòu)建物血管化的影響，以了解燈盞花素影響組織工程化口腔黏膜構(gòu)建物血管化的作用機(jī)制。 研究結(jié)果： 1.聚羥基乙酸和醫(yī)用膠原膜組織工程支架材料較瑞諾組織補(bǔ)片更適合構(gòu)建組織工程化口腔黏

4、膜。 2.不同濃度燈盞花素和bFGF都不能促進(jìn)膠原膜血管化。隨著聚羥基乙酸回植時(shí)間延長(zhǎng)，高濃度燈盞花素組的血管密度明顯高于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，高濃度燈盞花素能持續(xù)促進(jìn)聚羥基乙酸血管化。隨著燈盞花素的濃度升高，VEGF蛋白和核酸表達(dá)在聚羥基乙酸支架材料內(nèi)血管中表達(dá)有上升趨勢(shì)，且與燈盞花素濃度增加成正比。 3.高濃度燈盞花素組的組織工程支架材料PGA中的炎癥細(xì)胞明顯低于陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組(P＜0.05)，差別有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義。 4.高濃度燈盞花素組織工程化口腔黏膜構(gòu)建物的血管數(shù)比陰性對(duì)照組多(P＜0.05)，差別有顯著意義。 結(jié)論： 1.醫(yī)用膠原膜、聚羥基乙酸等構(gòu)建組織工程化口腔黏膜的不同支架材料各有優(yōu)缺點(diǎn)。 2.燈盞花素在不同支架材料構(gòu)建的組織工程化口腔黏膜構(gòu)建物的血管化方面作用不盡相同，其中在促進(jìn)支架材料聚羥基乙酸血管新生的同時(shí)，能明顯減少聚羥基乙酸的炎癥反應(yīng)。 3.高濃度的燈盞花素能顯著促進(jìn)組織工程化口