L-賴氨酸類氨肽酶N抑制劑的設(shè)計(jì)、合成與初步活性研究.pdf

1、氨肽酶N(APN，CD13)是一類含鋅離子的膜結(jié)合型外肽酶，在許多組織包括腎臟、小腸、肝臟及中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛表達(dá)。該酶參與了血管緊張素Ⅲ在腦部及外周器官的代謝，腦啡肽的降解和內(nèi)啡肽的失活。此外APN還是冠狀病毒229E和TEGV的受體。更為重要的是，腫瘤細(xì)胞表面有大量的APN表達(dá)，而Saiko及其同事證實(shí)APN(CD13)參與了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，APN還參與了免疫調(diào)節(jié)，降解多種免疫活性物質(zhì)，削弱巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的

2、識(shí)別和殺傷能力。因此，APN是研究抗腫瘤藥物一個(gè)重要靶點(diǎn)，而同時(shí)這也要求開發(fā)高效的、高選擇性和低毒性的APN抑制劑。 基于對(duì)APN抑制劑的結(jié)構(gòu)以及酶一抑制劑復(fù)合物的結(jié)合模式的研究，利用tripos公司的sybyl7.0軟件進(jìn)行分析和優(yōu)化，本文設(shè)計(jì)合成了以L-賴氨酸為骨架的兩個(gè)系列共二十個(gè)化合物。以N6-[(芐氧基)羰基]-L-賴氨酸為原料，經(jīng)甲酯化、酰化、再經(jīng)水解或氨解得到目標(biāo)化合物。目標(biāo)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)均經(jīng)過紅外光譜，電噴霧質(zhì)

3、譜和核磁共振氫譜的確證。 目標(biāo)化合物進(jìn)行了體外抑制APN的活性研究，以L-亮氨酰-對(duì)硝基苯胺為底物，測(cè)定化合物對(duì)APN的抑制活性；試驗(yàn)結(jié)果表明，本文所設(shè)計(jì)合成的大多數(shù)目標(biāo)化合物均具有較好APN抑制活性，其中化合物B6的IC50為13．21aM(Bestatin=15.51μM)。初步構(gòu)效關(guān)系分析顯示：zn<'2+>螯合基團(tuán)為羥肟酸的比羧酸的活性好；對(duì)于Rl基團(tuán)來說，芳環(huán)不同或芳環(huán)上取代基不同對(duì)化合物的活性也有影響，六元芳環(huán)的活性

4、比五元芳環(huán)的好，芳環(huán)上有吸電子基取代的活性更好。 同時(shí)，也對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行了體外抑制．MMP-2的活性試驗(yàn)，以確定其對(duì)MMP與APN的選擇性，以琥珀酰明膠為底物，TNBSA為顯色劑，測(cè)定化合物對(duì)MMP-2的抑制活性；結(jié)果表明多數(shù)化合物對(duì)MMP-2的抑制活性要比APN強(qiáng)，其中化合物A2的IC<,50>為2.93，這可能是由于MMP-2的催化中心在酶的表面，而APN的催化中心在酶的內(nèi)部，抑制劑分子容易和MMP-2結(jié)合的原因；而對(duì)AP