DLX1聯(lián)合BMP9促進人骨肉瘤細胞成骨分化的研究.pdf

1、第一部分 DLX1過表達對人骨肉瘤細胞惡性生物學(xué)行為及成骨分化的影響
　　目的：
　　探討DLX1過表達對人骨肉瘤細胞MG63惡性生物學(xué)行為及成骨分化的影響。
　　方法：
　　采用構(gòu)建有DLX1基因的重組腺病毒（adenovirus，Ad）AdDLX1和空載腺病毒AdRFP，分別感染人骨肉瘤細胞MG63，分為DLX1實驗組（AdDLX1感染組）和RFP對照組（AdRFP感染組），觀察細胞熒光表達情況并以 RT-P

2、CR和 Western blot驗證 DLX1的表達情況；Transwell實驗檢測 MG63細胞遷移和侵襲；DAPI染色和流式細胞術(shù)檢測 MG63細胞凋亡；CCK-8檢測 MG63細胞增殖；堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色和ALP讀數(shù)分析MG63細胞早期成骨能力，Western blot檢測骨橋蛋白（osteopontin，OPN）的蛋白表達，茜素紅染色檢測細胞晚期成骨能力；RT-PCR初篩相關(guān)信號通

3、路，Western blot驗證初篩陽性信號分子的蛋白表達情況。
　　結(jié)果：
　　1. AdDLX1和AdRFP分別感染MG63細胞后，與RFP對照組相比，AdDLX1能顯著增加骨肉瘤細胞MG63中DLX1的表達。
　　2. MG63細胞中DLX1過表達后，與RFP對照組相比，細胞遷移能力和侵襲能力下降。
　　3. MG63細胞中DLX1過表達后，與RFP對照組相比，過表達DLX1對細胞增殖、凋亡無明顯影響。

4、r>　　4. MG63細胞中DLX1過表達后，與RFP對照組相比，過表達DLX1對細胞成骨分化無明顯影響。
　　5. MG63細胞中DLX1過表達后，與RFP對照組相比，DLX1過表達可上調(diào)β-catenin mRNA和蛋白的表達。
　　結(jié)論：
　　1. MG63細胞中DLX1過表達后，對MG63細胞的惡性生物學(xué)行為有不同程度的影響：可抑制MG63細胞的遷移和侵襲，對MG63細胞的增殖和凋亡無顯著影響；對MG63細胞成

5、骨分化無明顯促進作用。
　　2. DLX1在MG63細胞中過表達后，Wnt/β-catenin信號通路參與DLX1對MG63細胞生物學(xué)行為的調(diào)控。
　　第二部分 DLX1聯(lián)合BMP9對人骨肉瘤細胞惡性生物學(xué)行為及成骨分化的影響
　　目的：
　　探討DLX1聯(lián)合BMP9對人骨肉瘤細胞MG63惡性生物學(xué)行為及成骨分化的影響。
　　方法：
　　采用構(gòu)建有 DLX1和 BMP9基因的重組腺病毒 AdDLX1和

6、AdBMP9，單獨或聯(lián)合感染人骨肉瘤MG63細胞，分為RFP組（AdRFP感染組）、BMP9組（AdBMP9+AdRFP感染組）、DLX1+BMP9組（AdDLX1+AdBMP9感染組）、DLX1組（AdDLX1+AdGFP感染組），觀察細胞熒光表達情況并以RT-PCR和Western blot驗證DLX1、BMP9 mRNA和蛋白表達情況；Transwell實驗檢測MG63細胞遷移和侵襲；DAPI染色和流式細胞術(shù)檢測MG63細胞凋亡；

7、CCK-8檢測MG63細胞增殖；ALP染色和 ALP讀數(shù)分析細胞早期成骨能力，Western blot檢測骨橋蛋白（osteopontin，OPN）的蛋白表達，茜素紅染色檢測細胞晚期成骨能力；采用RT-PCR初篩相關(guān)信號通路，Western blot驗證初篩陽性信號分子的蛋白表達情況。
　　結(jié)果：
　　1. AdDLX1單獨感染MG63細胞后，細胞中DLX1的 mRNA和蛋白表達上調(diào)；AdBMP9單獨感染MG63細胞后，細胞

8、中BMP9的 mRNA和蛋白表達上調(diào)；AdDLX1和AdBMP9聯(lián)合感染MG63細胞后，細胞中DLX1、BMP9的mRNA和蛋白表達均上調(diào)。
　　2.與RFP組相比，BMP9組、DLX1+BMP9組、DLX1組中MG63細胞遷移和侵襲能力均下降，且DLX1+BMP9組對遷移和侵襲能力的抑制較BMP9組和DLX1組有所增加。
　　3.與RFP組相比，BMP9組、DLX1+BMP9組中MG63細胞增殖能力均下降，且兩組 MG63

9、細胞受到的增殖抑制無明顯差異；DLX1組細胞增殖較RFP組無明顯差異。
　　4.與RFP組相比，BMP9組、DLX1+BMP9組、DLX1組中MG63細胞凋亡無明顯差異。
　　5.與RFP組相比，BMP9組中MG63細胞ALP活性、OPN蛋白表達和鈣鹽沉積有所增加，但增加程度有限；DLX1+BMP9組中MG63細胞ALP活性增強、OPN蛋白表達上調(diào)、鈣鹽沉積明顯增加；DLX1組中MG63細胞ALP活性、OPN蛋白表達和鈣鹽沉

10、積無明顯增加。
　　結(jié)論：
　　1. DLX1單獨作用于人骨肉瘤細胞MG63時，可抑制MG63細胞遷移和侵襲，對 MG63細胞凋亡和增殖無明顯影響；不能促進 MG63細胞成骨分化。
　　2. BMP9單獨作用于人骨肉瘤細胞MG63時，可抑制MG63細胞遷移、侵襲和增殖，對MG63細胞凋亡無明顯影響；對MG63細胞成骨分化的促進作用較弱。
　　3. DLX1與BMP9聯(lián)合作用后，可抑制MG63細胞遷移、侵襲和增殖，