新生兒膿毒癥miRNAs表達(dá)譜及其免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、第一部分新生兒膿毒癥miRNAs表達(dá)譜及其對(duì)免疫應(yīng)答基因和蛋白的調(diào)節(jié)
　　目的:miRNAs在免疫系統(tǒng)的異常表達(dá)可能在抗感染免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵的作用，并且參與到膿毒癥的免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中。本研究的目的在于探索miRNAs在新生兒膿毒癥的免疫應(yīng)答調(diào)控中的重要作用。
　　方法:首先，我們采用微陣列技術(shù)檢測(cè)了來(lái)自膿毒癥新生兒和非感染新生兒的外周血白細(xì)胞的miRNAs表達(dá)譜。然后，基于靶基因預(yù)測(cè)的方法，我們從這些差異表達(dá)的miRNAs中

2、挑選出26個(gè)免疫相關(guān)的miRNAs，采用熒光定量PCR的方法進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)。同時(shí)，我們運(yùn)用了PCR Array及蛋白芯片技術(shù)分別對(duì)這些新生兒白細(xì)胞免疫應(yīng)答基因的表達(dá)譜和血漿中的免疫及炎癥相關(guān)細(xì)胞因子進(jìn)行了定量檢測(cè)，以探尋這些顯著變化的miRNAs對(duì)新生兒膿毒癥免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)果:與非感染新生兒相比，膿毒癥新生兒中的10個(gè)免疫調(diào)控miRNAs在表達(dá)量上出現(xiàn)了2倍以上的明顯變化。而11個(gè)免疫應(yīng)答基因及15個(gè)血漿細(xì)胞因子或

3、受體也在膿毒癥新生兒中出現(xiàn)明顯的上調(diào)或下調(diào)。綜合分析結(jié)果表明，這些異常表達(dá)的miRNAs對(duì)新生兒膿毒癥免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)以負(fù)向和抑制反應(yīng)占優(yōu)勢(shì)。
　　結(jié)論:我們的研究證明在新生兒膿毒癥中存在某些miRNAs表達(dá)水平的異常，這些顯著變化的miRNAs很可能參與了新生兒膿毒癥免疫應(yīng)答的調(diào)控，所表現(xiàn)出的新生兒炎癥反應(yīng)的特點(diǎn)與其免疫功能的不成熟有關(guān)。
　　第二部分 LPS誘導(dǎo)的臍血白細(xì)胞miRNAs表達(dá)譜和對(duì)TLR通路的調(diào)節(jié)及

4、其與成人的差異
　　目的:為進(jìn)一步證實(shí)miRNAs在新生兒抗感染免疫和炎癥反應(yīng)中的作用。本研究通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)，檢測(cè)LPS誘導(dǎo)的臍血白細(xì)胞miRNAs表達(dá)譜變化，探討miRNAs在新生兒固有免疫，尤其是在TLR信號(hào)通路中的調(diào)控作用，同時(shí)比較臍血白細(xì)胞與成人外周血白細(xì)胞miRNAs對(duì)LPS刺激的應(yīng)答差異，以進(jìn)一步探討新生兒對(duì)感染的易感機(jī)制。
　　方法:采集臍血和成人外周血標(biāo)本進(jìn)行體外全血細(xì)胞培養(yǎng)，在加入LPS刺激2h后收獲和分

5、離白細(xì)胞，抽提總RNA，應(yīng)用微陣列技術(shù)和PCR Array分別檢測(cè)LPS誘導(dǎo)的miRNAs和TLR相關(guān)基因的表達(dá)譜。運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析這些miRNAs可能參與調(diào)控的生物過(guò)程，及其作用于TLR信號(hào)通路的靶基因。
　　結(jié)果:臍血白細(xì)胞經(jīng)LPS誘導(dǎo)后（與未刺激細(xì)胞相比）共有85個(gè)miRNAs及41個(gè)TLR相關(guān)基因被檢測(cè)到有差異表達(dá)的現(xiàn)象;與LPS刺激的成人外周血白細(xì)胞相比，共有53個(gè)miRNAs及29個(gè)TLR相關(guān)基因差異表達(dá)。生物信

6、息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，LPS誘導(dǎo)臍血白細(xì)胞（與未刺激細(xì)胞相比）上調(diào)和下調(diào)的這些miRNAs的靶基因共同參與到細(xì)胞生物合成過(guò)程，基因表達(dá)，大分子生物合成過(guò)程等的調(diào)控中;而與LPS刺激的成人外周血白細(xì)胞相比上調(diào)和下調(diào)的miRNAs的靶基因分別在細(xì)胞蛋白質(zhì)代謝過(guò)程和高分子代謝過(guò)程的負(fù)調(diào)控等生物過(guò)程存在差異。LPS誘導(dǎo)臍血白細(xì)胞（與未刺激細(xì)胞相比）產(chǎn)生的11個(gè)差異表達(dá)的TLR信號(hào)通路基因的cDNA序列中，我們發(fā)現(xiàn)了13個(gè)潛在的miRNA-mRNA相互作

7、用位點(diǎn);而與LPS刺激的成人外周血白細(xì)胞相比產(chǎn)生的10個(gè)差異表達(dá)的TLR信號(hào)通路基因則接受12個(gè)差異表達(dá)的miRNAs的調(diào)控。
　　結(jié)論:我們的體外細(xì)胞培養(yǎng)研究證實(shí)，在細(xì)菌內(nèi)毒素LPS誘導(dǎo)的急性炎癥反應(yīng)中miRNAs表達(dá)譜發(fā)生了顯著的變化，并且臍血白細(xì)胞與成人白細(xì)胞的miRNAs表達(dá)譜存在明顯差異。這些miRNAs調(diào)控的預(yù)測(cè)靶基因參與多個(gè)重要的生物過(guò)程。LPS誘導(dǎo)的miRNAs對(duì)TLR信號(hào)通路可能發(fā)揮重要的免疫調(diào)控作用，并且這種調(diào)