基于TPGS-b-PBAE共聚物的pH敏感納米載藥系統(tǒng)逆轉腫瘤耐藥的研究.pdf

1、惡性腫瘤是嚴重危害我國人民生命健康的重大疾病，多藥耐藥（Multidrug resistance，MDR）是癌癥臨床治療失敗的主要原因之一。細胞膜上高表達的P-糖蛋白（P-gp）是腫瘤產生多藥耐藥性的一個重要原因，導致單一的抗腫瘤化療效果較差?；诩{米技術的藥物輸送系統(tǒng)可以將抗腫瘤藥物主動靶向輸送到腫瘤部位，從而提高腫瘤細胞對藥物的敏感性，為逆轉腫瘤多藥耐藥提供了新思路。
　　基于以上問題和思路，本項目設計出了一種能實現(xiàn)P-gp抑

2、制和藥物快速釋放的新型pH敏感納米給藥系統(tǒng)，用于化療藥的輸送。研究內容主要包括以下三個部分。
　　第一部分，TPGS-b-PBAE共聚物的合成與表征
　　目的：合成新型pH敏感材料TP接枝聚合物，為下一步做納米制劑打下基礎。
　　方法：本論文通過丙烯酰氯的酰氯基與TPGS上的羥基發(fā)生反應，使親水性TPGS可以通過邁克爾加成反應，成功的連接于疏水性的PBAE。產物的化學結構采用核磁共振氫譜（1HNMR）、紅外光譜（FTI

3、R）進行表征分析。
　　結論：核磁共振氫譜、紅外光譜證明TPGS成功接枝偶聯(lián)到PBAE上。此法反應路線簡單、條件溫和、純化方法簡單，為下一步納米粒的形成創(chuàng)造出有利條件。
　　第二部分，TPGS-b-PBAE納米粒的制備及其理化性質的考察
　　目的：初步評價TP納米粒包載和運輸化療藥物的潛在價值，探索該納米粒的pH敏感響應特性。
　　方法：本論文采用超聲乳化/溶劑揮發(fā)法制備納米粒，通過單因素考察探索出制備納米粒的最

4、優(yōu)條件。通過體外不同pH介質中粒徑變化和釋放藥量的變化探討該納米粒的pH敏感響應特性。
　　結論：合成的高聚物通過超聲乳化法制備得包載Docetaxel(DTX)的納米粒，該納米粒在SEM下呈現(xiàn)圓形或橢圓形的形態(tài)，均一完整，平均粒徑在范圍在200～300nm之間，分布較窄，且粒徑隨接枝度的增加而減小。體外釋放表明納米粒具有明顯的pH敏感特性。為下一步消滅腫瘤細胞的提供了理論支持和基礎。
　　第三部分，TPGS-b-PBAE納

5、米粒的體外細胞評價
　　目的：初步評價TP納米粒逆轉腫瘤多藥耐藥的潛在價值，探索該納米?？朔[瘤耐藥的機制。
　　方法：本論文利用激光共聚焦進行直觀定性觀察，探索細胞對不同載藥納米粒的攝取與轉運情況。利用MTT法測定納米粒對乳腺癌細胞的毒性。通過細胞凋亡和細胞周期2個方面初步對載藥納米粒逆轉A2780/T耐藥細胞多藥耐藥的機理進行研究。通過Western blot，ATP水平，羅丹明潴留實驗，研究TPGS對A2780/T中過

6、量表達的P-gp的影響。
　　結論：MTT實驗結果表明相對于陽性對照DTX，載藥納米粒都呈現(xiàn)更明顯的細胞生長抑制作用。而耐藥細胞的IC50值更是僅為DTX的1％。耐藥作用機制研究表明該pH敏感納米粒可顯著誘導細胞早期凋亡，增加細胞在G2/M期的滯留。羅丹明123潴留、ATP水平和Westernblot實驗證實了聚合物中的側鏈TPGS下調ATP水平，抑制P-gp的外排功能，進而逆轉了腫瘤的多藥耐藥。因此，基于TPGS-b-PBAE的

7、pH敏感納米粒是值得進行深入系統(tǒng)研究的新型抗腫瘤控釋體系。
　　本論文創(chuàng)新點：針對目前單一的抗腫瘤化療效果較差的問題，提出構建具有P-gp抑制功能的pH敏感高分子載體系統(tǒng)，從而同步實現(xiàn)P-gp的抑制和藥物快速釋放，達到提高抗腫瘤化療效果的目的。所構建的新型高分子載藥膠束具有以下特征：在胞外，TPGS作為水合層起到穩(wěn)定膠束、實現(xiàn)體內長循環(huán)；在胞內，TPGS通過還原響應分離，與P-gp結合，抑制藥物的外排，該過程與PBAE在內涵體中通