小鼠新型胚胎干細(xì)胞在不同培養(yǎng)條件下的轉(zhuǎn)換.pdf

1、隨著小鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)的研究越來(lái)越受到關(guān)注，各實(shí)驗(yàn)室利用不同培養(yǎng)基建立了不同多能性狀態(tài)的干細(xì)胞系，包括由本實(shí)驗(yàn)室利用四種細(xì)胞因子ABCL(ActivinA、BMP4、CHIR99021和mLif)誘導(dǎo)類(lèi)胚層干細(xì)胞系(AFSCs)獲得的新型胚胎干細(xì)胞系A(chǔ)SCs(Advanced Stem Cells)。在本文中，我們利用分別缺少ABCL中單個(gè)細(xì)胞因子的培養(yǎng)基[A(-)組、B（-）組、C(-)組及L（-）組]培養(yǎng)GOF-GFP標(biāo)記的AFSC

2、s，同時(shí)以添加ABCL培養(yǎng)基為對(duì)照組，研究ABCL四種細(xì)胞因子在誘導(dǎo)和維持ASCs多能性中的作用。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴ABCL組的GOF-GFP陽(yáng)性克隆出現(xiàn)的最早，數(shù)量也最多，并能穩(wěn)定傳代，即新型胚胎干細(xì)胞系A(chǔ)SCs。⑵除A(-)組沒(méi)有出現(xiàn)GOF-GFP陽(yáng)性克隆以外，其余三組均有GOF-GFP陽(yáng)性克隆出現(xiàn):B(-)組在培養(yǎng)后第5天、L(-)組在第6天、C(-)組在第10天依次出現(xiàn)GOF-GFP陽(yáng)性克隆。但是否可獲得穩(wěn)定的干

3、細(xì)胞系還有待進(jìn)一步研究。⑶實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)結(jié)果表明，ABCL組細(xì)胞的多能性基因表達(dá)水平隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加明顯高于其它四個(gè)單個(gè)細(xì)胞因子缺少組，如Nanog的表達(dá)。結(jié)果還顯示，ActivinA的主要作用為促進(jìn)多能性基因的表達(dá)，并抑制AFSCs向表皮方向的分化;BMP4的作用為抑制神經(jīng)相關(guān)基因，同時(shí)促進(jìn)部分多能性基因表達(dá);mLif的作用主要為抑制原始內(nèi)胚層(PrE)相關(guān)基因的表達(dá)，并促進(jìn)多能性基因表達(dá);而CHIR的作用并不