同一載體雙靶點(diǎn)干擾紫杉醇耐藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文同一載體雙靶點(diǎn)干擾紫杉醇耐藥的實(shí)驗(yàn)研究姓名：周一舟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：杜秀平201204徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論丈莉約引芙指標(biāo)：糾胞生長(zhǎng)抑制率(IR)、細(xì)№、卜數(shù)抑制濃度(IC50)、，付藥指數(shù)(RI)、棚劉‘逆轉(zhuǎn)效率。結(jié)果1誘導(dǎo)A549／Tax細(xì)胞，使該細(xì)胞能在1定濃度的紫杉醇環(huán)境’∥|長(zhǎng)。A549和A549／Tax細(xì)胞生長(zhǎng)曲線比較顯示，A549／Tax細(xì)胞增殖較親本細(xì)胞快，指數(shù)生長(zhǎng)期稍早fB現(xiàn)(

2、傳代后3～4d)，而A549細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)期則在第4～5天。A549和A549／‘j、ax細(xì)胞倍增時(shí)『白J分別為33466土O583小時(shí)和423401490小時(shí)，耐藥細(xì)胞倍增時(shí)間是親代細(xì)胞的1265倍(PO05)，增殖速度明顯減慢。2加紫杉醇后，A549／Tax細(xì)胞相對(duì)A549細(xì)胞耐藥指數(shù)升高。A549對(duì)紫杉醇的IC50為00167土O0026mg／L，A549／Tax細(xì)胞對(duì)紫杉醇的IC50為05933士04611mg／L，A549／Ta

3、x細(xì)胞對(duì)Tax的耐藥指數(shù)(RI)為3608士486倍(P005)。3用轉(zhuǎn)移質(zhì)粒(PLB，bcl—2一stathmin／shRNA、PLB—bcl—2shRNA矛口PLB—stathmin／shRNAl、包裝質(zhì)粒△NRF和包膜蛋白質(zhì)粒VSV—G共轉(zhuǎn)染293FT病毒包裝細(xì)胞后，熒光顯微鏡下觀察到較強(qiáng)的綠色熒光蛋白表達(dá)，轉(zhuǎn)染率約為80％。表明慢病毒顆粒包裝『F確。4用包裝好的慢病毒干擾載體分別感染A549／Tax細(xì)胞，48小時(shí)后熒光顯微鏡下觀

4、察綠色熒光蛋白表達(dá)，轉(zhuǎn)染率約為536土24％，表明轉(zhuǎn)染成功。5盯PCR及Westemblot顯示bcl一2A549／Tax細(xì)胞組，對(duì)bcl—2在mRNA水平的抑制率為23土001％，在蛋白水平的抑制率為12土001％(PO05)；stathminA549／Tax細(xì)胞組，對(duì)stathmin在mI礬A水平的抑制率為20土002％，在蛋白水平的抑制率為17士002％(P005)；雙靶點(diǎn)B—SA549／Tax細(xì)胞組，對(duì)bcl—2在mRNA水平的