二甲雙胍、羅格列酮對(duì)脂肪和肝臟色素上皮衍生因子表達(dá)分泌的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分二甲雙胍對(duì)脂肪和肝臟色素上皮衍生因子表達(dá)分泌的影響及機(jī)制研究
　　 目的:探討二甲雙胍對(duì)脂肪和肝臟色素上皮衍生因子(PEDF)表達(dá)和分泌的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:(1)高脂飲食喂養(yǎng)SD雄性大鼠15周構(gòu)建肥胖大鼠模型，隨后予以二甲雙胍400mg/d/kg或生理鹽水灌胃4周，干預(yù)結(jié)束時(shí)采用高胰島素-正葡萄糖鉗夾術(shù)評(píng)估胰島素敏感性，結(jié)果用葡萄糖輸注率表示。同時(shí)檢測(cè)血糖、胰島素、血脂、血清PEDF及白色脂肪、棕色脂

2、肪、肝臟、肌肉組織PEDF的mRNA和蛋白表達(dá)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平。(2)采用高胰島素(50nM)作用于HepG2肝細(xì)胞和3T3-L1脂肪細(xì)胞24h，檢測(cè)葡萄糖(2-NBDG)的攝取，以建立胰島素抵抗的肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞模型。予以胰島素抵抗的肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞二甲雙胍(0.1mM)或二甲雙胍聯(lián)合AMPK抑制劑Compound C(40uM)處理，ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清PEDF，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞PEDF的mRNA和蛋白表達(dá)

3、。
　　 結(jié)果:(1)與普通飲食組相比，肥胖組大鼠空腹胰島素升高、葡萄糖輸注率降低，表現(xiàn)出明顯的胰島素抵抗;同時(shí)肥胖大鼠血清PEDF升高，且血清PEDF水平與葡萄糖輸注率負(fù)相關(guān);此外，肥胖大鼠白色脂肪、棕色脂肪、肝臟和肌肉組織PEDF的mRNA和蛋白表達(dá)明顯上調(diào);二甲雙胍干預(yù)4周后，葡萄糖輸注率明顯增加，大鼠胰島素抵抗改善，同時(shí)組織AMPK磷酸化水平上調(diào)，血清PEDF水平降低，組織PEDF的mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)。(2)高胰島素

4、處理的HepG2細(xì)胞和3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取減少，胰島素抵抗模型構(gòu)建成功。與正常對(duì)照相比，胰島素抵抗的肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞PEDF分泌和表達(dá)增加，而二甲雙胍處理24h后，AMPK磷酸化水平上調(diào)，肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞PEDF的表達(dá)和分泌下調(diào)，AMPK抑制劑明顯減弱二甲雙胍對(duì)PEDF表達(dá)分泌的影響。
　　 結(jié)論:二甲雙胍通過促進(jìn)AMPK磷酸化，抑制脂肪和肝臟PEDF表達(dá)分泌，且這一過程與二甲雙胍改善胰島素抵抗相關(guān)。
　　 第

5、二部分羅格列酮對(duì)脂肪和肝臟色素上皮衍生因子表達(dá)分泌的影響及機(jī)制研究
　　 目的:探討羅格列酮對(duì)脂肪和肝臟色素上皮衍生因子(PEDF)表達(dá)和分泌的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:(1)高脂飲食喂養(yǎng)SD雄性大鼠15周構(gòu)建肥胖大鼠模型，隨后予以羅格列酮4mg/d/kg或生理鹽水灌胃4周，干預(yù)結(jié)束時(shí)用高胰島素正葡萄糖鉗夾術(shù)評(píng)估胰島素敏感性，結(jié)果用葡萄糖輸注率表示。檢測(cè)血糖、胰島素、血脂、血清PEDF及白色脂肪、棕色脂肪、肝臟、肌肉

6、組織PEDF的mRNA和蛋白表達(dá)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平。(2)采用高胰島素（50nM）作用于HepG2肝細(xì)胞和3T3-L1脂肪細(xì)胞24h，檢測(cè)葡萄糖（2-NBDG）的攝取，以建立胰島素抵抗的肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞模型。對(duì)胰島素抵抗的肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分別予以羅格列酮(1uM)、羅格列酮聯(lián)合PPARγ抑制劑GW9662(10uM)、羅格列酮聯(lián)合AMPK抑制劑Compound C(40uM)處理，ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清PEDF

7、，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞PEDF的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:(1)與普通飲食組相比，肥胖組大鼠空腹胰島素升高、葡萄糖輸注率降低，表現(xiàn)出明顯的胰島素抵抗;同時(shí)肥胖大鼠血清PEDF升高，且血清PEDF水平與葡萄糖輸注率負(fù)相關(guān);此外，肥胖大鼠白色脂肪、棕色脂肪、肝臟和肌肉組織PEDF的mRNA和蛋白表達(dá)明顯上調(diào);羅格列酮干預(yù)4周后，葡萄糖輸注率明顯增加，大鼠胰島素抵抗改善，同時(shí)組織AMPK磷酸化水平上調(diào)，血清PEDF水平降低，組織PED

8、F的mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)。(2)高胰島素處理的HepG2細(xì)胞和3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取減少，胰島素抵抗模型構(gòu)建成功。與正常對(duì)照相比，胰島素抵抗的肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞PEDF分泌和表達(dá)增加，而羅格列酮處理24h后，肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞PEDF的表達(dá)和分泌下調(diào)，但與單用羅格列酮組相比，羅格列酮聯(lián)合PPARγ抑制劑組PEDF的表達(dá)和分泌無明顯變化。而羅格列酮組AMPK磷酸化水平上調(diào)，且羅格列酮聯(lián)合聯(lián)合AMPK抑制劑可明顯減弱羅格列酮對(duì)PEDF