二甲雙胍、羅格列酮對脂肪和肝臟色素上皮衍生因子表達分泌的影響及機制研究.pdf

1、第一部分二甲雙胍對脂肪和肝臟色素上皮衍生因子表達分泌的影響及機制研究
　　 目的:探討二甲雙胍對脂肪和肝臟色素上皮衍生因子(PEDF)表達和分泌的影響及相關(guān)機制。
　　 方法:(1)高脂飲食喂養(yǎng)SD雄性大鼠15周構(gòu)建肥胖大鼠模型，隨后予以二甲雙胍400mg/d/kg或生理鹽水灌胃4周，干預(yù)結(jié)束時采用高胰島素-正葡萄糖鉗夾術(shù)評估胰島素敏感性，結(jié)果用葡萄糖輸注率表示。同時檢測血糖、胰島素、血脂、血清PEDF及白色脂肪、棕色脂

2、肪、肝臟、肌肉組織PEDF的mRNA和蛋白表達及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平。(2)采用高胰島素(50nM)作用于HepG2肝細胞和3T3-L1脂肪細胞24h，檢測葡萄糖(2-NBDG)的攝取，以建立胰島素抵抗的肝細胞和脂肪細胞模型。予以胰島素抵抗的肝細胞和脂肪細胞二甲雙胍(0.1mM)或二甲雙胍聯(lián)合AMPK抑制劑Compound C(40uM)處理，ELISA檢測細胞上清PEDF，同時檢測細胞PEDF的mRNA和蛋白表達

3、。
　　 結(jié)果:(1)與普通飲食組相比，肥胖組大鼠空腹胰島素升高、葡萄糖輸注率降低，表現(xiàn)出明顯的胰島素抵抗;同時肥胖大鼠血清PEDF升高，且血清PEDF水平與葡萄糖輸注率負相關(guān);此外，肥胖大鼠白色脂肪、棕色脂肪、肝臟和肌肉組織PEDF的mRNA和蛋白表達明顯上調(diào);二甲雙胍干預(yù)4周后，葡萄糖輸注率明顯增加，大鼠胰島素抵抗改善，同時組織AMPK磷酸化水平上調(diào)，血清PEDF水平降低，組織PEDF的mRNA和蛋白表達下調(diào)。(2)高胰島素

4、處理的HepG2細胞和3T3-L1脂肪細胞葡萄糖攝取減少，胰島素抵抗模型構(gòu)建成功。與正常對照相比，胰島素抵抗的肝細胞和脂肪細胞PEDF分泌和表達增加，而二甲雙胍處理24h后，AMPK磷酸化水平上調(diào)，肝細胞和脂肪細胞PEDF的表達和分泌下調(diào)，AMPK抑制劑明顯減弱二甲雙胍對PEDF表達分泌的影響。
　　 結(jié)論:二甲雙胍通過促進AMPK磷酸化，抑制脂肪和肝臟PEDF表達分泌，且這一過程與二甲雙胍改善胰島素抵抗相關(guān)。
　　 第

5、二部分羅格列酮對脂肪和肝臟色素上皮衍生因子表達分泌的影響及機制研究
　　 目的:探討羅格列酮對脂肪和肝臟色素上皮衍生因子(PEDF)表達和分泌的影響及相關(guān)機制。
　　 方法:(1)高脂飲食喂養(yǎng)SD雄性大鼠15周構(gòu)建肥胖大鼠模型，隨后予以羅格列酮4mg/d/kg或生理鹽水灌胃4周，干預(yù)結(jié)束時用高胰島素正葡萄糖鉗夾術(shù)評估胰島素敏感性，結(jié)果用葡萄糖輸注率表示。檢測血糖、胰島素、血脂、血清PEDF及白色脂肪、棕色脂肪、肝臟、肌肉

6、組織PEDF的mRNA和蛋白表達和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平。(2)采用高胰島素（50nM）作用于HepG2肝細胞和3T3-L1脂肪細胞24h，檢測葡萄糖（2-NBDG）的攝取，以建立胰島素抵抗的肝細胞和脂肪細胞模型。對胰島素抵抗的肝細胞和脂肪細胞分別予以羅格列酮(1uM)、羅格列酮聯(lián)合PPARγ抑制劑GW9662(10uM)、羅格列酮聯(lián)合AMPK抑制劑Compound C(40uM)處理，ELISA檢測細胞上清PEDF

7、，同時檢測細胞PEDF的mRNA和蛋白表達。
　　 結(jié)果:(1)與普通飲食組相比，肥胖組大鼠空腹胰島素升高、葡萄糖輸注率降低，表現(xiàn)出明顯的胰島素抵抗;同時肥胖大鼠血清PEDF升高，且血清PEDF水平與葡萄糖輸注率負相關(guān);此外，肥胖大鼠白色脂肪、棕色脂肪、肝臟和肌肉組織PEDF的mRNA和蛋白表達明顯上調(diào);羅格列酮干預(yù)4周后，葡萄糖輸注率明顯增加，大鼠胰島素抵抗改善，同時組織AMPK磷酸化水平上調(diào)，血清PEDF水平降低，組織PED

8、F的mRNA和蛋白表達下調(diào)。(2)高胰島素處理的HepG2細胞和3T3-L1脂肪細胞葡萄糖攝取減少，胰島素抵抗模型構(gòu)建成功。與正常對照相比，胰島素抵抗的肝細胞和脂肪細胞PEDF分泌和表達增加，而羅格列酮處理24h后，肝細胞和脂肪細胞PEDF的表達和分泌下調(diào)，但與單用羅格列酮組相比，羅格列酮聯(lián)合PPARγ抑制劑組PEDF的表達和分泌無明顯變化。而羅格列酮組AMPK磷酸化水平上調(diào)，且羅格列酮聯(lián)合聯(lián)合AMPK抑制劑可明顯減弱羅格列酮對PEDF