APE1-Ref-1在腫瘤放射治療策略中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文APE1Ref1在腫瘤放射治療策略中的實(shí)驗(yàn)研究姓名：余舒亮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：王東20090501第二軍醫(yī)大學(xué)碩十學(xué)位論文2研究雙功能基因APEl／Ref1在小鼠放射性肺損傷過程中肺組織中的表達(dá)及其與放射性損傷之間的演進(jìn)關(guān)系；3分析小鼠肺組織過表達(dá)APEl／Ref1蛋白后，APEl／Ref1對(duì)放射性損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。研究內(nèi)容和方法1重組腺病毒載體Ad5／F35一APEl瓜ef1siR

2、NA聯(lián)合人重組腺病毒rAdp53增強(qiáng)肝癌細(xì)胞對(duì)放射治療敏感性的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究：建立裸鼠人肝癌動(dòng)物模型，觀察Ad5／F35一APEl瓜eflsiRNA聯(lián)合rAd—p53增強(qiáng)肝癌細(xì)胞對(duì)放射治療敏感性的作用，測量腫瘤的生長，繪制腫瘤生長曲線，HE染色，光鏡觀察腫瘤的組織學(xué)變化，免疫組化和TUNEL法檢測腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡。2APEl／Ref1在小鼠放射性肺損傷中的表達(dá)特點(diǎn)及其意義：建立放射性肺損傷小鼠動(dòng)物模型，采用HE染色，光鏡觀察小鼠放射性肺

3、損傷的組織學(xué)變化，免疫組化和Westernblot檢測小鼠放射性肺損傷過程中APEl／Ref1蛋白表達(dá)變化特點(diǎn)，分析APEl／Ref1表達(dá)變化特點(diǎn)與放射性肺損傷的關(guān)系，為進(jìn)一步以APEl／Ref1為靶點(diǎn)的基因防治放射性損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。3APEl／Ref1過表達(dá)對(duì)放射性肺損傷的保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究：建立放射性肺損傷小鼠動(dòng)物模型，觀察質(zhì)粒pcDNA31／flAPEl／Ref1和pcDNA31／mtAPEl／Ref1經(jīng)尾靜脈注射轉(zhuǎn)染小鼠肺組織

4、后，過表達(dá)APEl／Ref1蛋白對(duì)小鼠放射性肺損傷的保護(hù)效果。采用HE和Masson三聯(lián)染色，光鏡觀察小鼠放射性肺損傷的組織學(xué)變化，免疫組化和Westernblot檢測小鼠放射性肺損傷過程中APEl／Ref1蛋白表達(dá)變化，酶聯(lián)免疫吸附分析法檢測血清中TGF91水平，分析過表達(dá)APEl／Ref1蛋白對(duì)小鼠放射性肺損傷的保護(hù)作用。主要研究結(jié)果如下：1重組腺病毒載體Ad5／F35一APEl瓜ef1siRNA聯(lián)合人重組腺病毒rAdp53增強(qiáng)肝癌

5、細(xì)胞對(duì)放射治療敏感性的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究：Ad5／F35一APEl／Ref1siRNArAdp53IR聯(lián)合治療組治療腫瘤后腫瘤的生長抑制率為9395％，顯著高于對(duì)照組和其他治療組(p均O01)。與對(duì)照組腫瘤細(xì)胞相比，兩種腺病毒分別有效抑制了APEl／Ref1和提高了p53蛋白的表達(dá)水平。HE染色觀察腫瘤組織學(xué)變化顯示，各治療組腫瘤內(nèi)都出現(xiàn)程度不同的灶性壞死，其中Ad5／F35一APEl／Ref1siRNArAdp53IR聯(lián)合治療組腫瘤壞死較多