APE1-Ref-1在腫瘤放射治療策略中的實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文APE1Ref1在腫瘤放射治療策略中的實驗研究姓名：余舒亮申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導教師：王東20090501第二軍醫(yī)大學碩十學位論文2研究雙功能基因APEl／Ref1在小鼠放射性肺損傷過程中肺組織中的表達及其與放射性損傷之間的演進關(guān)系；3分析小鼠肺組織過表達APEl／Ref1蛋白后，APEl／Ref1對放射性損傷的保護作用及其可能機制。研究內(nèi)容和方法1重組腺病毒載體Ad5／F35一APEl瓜ef1siR

2、NA聯(lián)合人重組腺病毒rAdp53增強肝癌細胞對放射治療敏感性的體內(nèi)實驗研究：建立裸鼠人肝癌動物模型，觀察Ad5／F35一APEl瓜eflsiRNA聯(lián)合rAd—p53增強肝癌細胞對放射治療敏感性的作用，測量腫瘤的生長，繪制腫瘤生長曲線，HE染色，光鏡觀察腫瘤的組織學變化，免疫組化和TUNEL法檢測腫瘤細胞增殖和凋亡。2APEl／Ref1在小鼠放射性肺損傷中的表達特點及其意義：建立放射性肺損傷小鼠動物模型，采用HE染色，光鏡觀察小鼠放射性肺

3、損傷的組織學變化，免疫組化和Westernblot檢測小鼠放射性肺損傷過程中APEl／Ref1蛋白表達變化特點，分析APEl／Ref1表達變化特點與放射性肺損傷的關(guān)系，為進一步以APEl／Ref1為靶點的基因防治放射性損傷提供實驗依據(jù)。3APEl／Ref1過表達對放射性肺損傷的保護作用的實驗研究：建立放射性肺損傷小鼠動物模型，觀察質(zhì)粒pcDNA31／flAPEl／Ref1和pcDNA31／mtAPEl／Ref1經(jīng)尾靜脈注射轉(zhuǎn)染小鼠肺組織

4、后，過表達APEl／Ref1蛋白對小鼠放射性肺損傷的保護效果。采用HE和Masson三聯(lián)染色，光鏡觀察小鼠放射性肺損傷的組織學變化，免疫組化和Westernblot檢測小鼠放射性肺損傷過程中APEl／Ref1蛋白表達變化，酶聯(lián)免疫吸附分析法檢測血清中TGF91水平，分析過表達APEl／Ref1蛋白對小鼠放射性肺損傷的保護作用。主要研究結(jié)果如下：1重組腺病毒載體Ad5／F35一APEl瓜ef1siRNA聯(lián)合人重組腺病毒rAdp53增強肝癌

5、細胞對放射治療敏感性的體內(nèi)實驗研究：Ad5／F35一APEl／Ref1siRNArAdp53IR聯(lián)合治療組治療腫瘤后腫瘤的生長抑制率為9395％，顯著高于對照組和其他治療組(p均O01)。與對照組腫瘤細胞相比，兩種腺病毒分別有效抑制了APEl／Ref1和提高了p53蛋白的表達水平。HE染色觀察腫瘤組織學變化顯示，各治療組腫瘤內(nèi)都出現(xiàn)程度不同的灶性壞死，其中Ad5／F35一APEl／Ref1siRNArAdp53IR聯(lián)合治療組腫瘤壞死較多