KDM1A對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、背景：
　　根據(jù)WHO統(tǒng)計數(shù)據(jù)，全世界范圍內(nèi)，在腫瘤疾病中，胃癌的發(fā)病率位居第四，死亡率則是第二位。其發(fā)病率有地域及性別差異，我國屬胃癌高發(fā)區(qū)域，胃癌的流行病學(xué)形勢更加嚴(yán)峻。因胃癌的早期臨床表現(xiàn)缺乏特征性，不易引起患者重視，且我國胃癌普查制度尚未完善，診斷時許多患者已至進(jìn)展期，雖然大多數(shù)患者會接受手術(shù)治療，但術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)嚴(yán)重影響胃癌患者預(yù)后。
　　賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1(KDM1A)位于人類1號染色體短臂3區(qū)6帶1

2、2亞帶。KDM1A是第一個被定義的組蛋白特異性去甲基化酶，能夠特異性的去除組蛋白H3第4位及第9位賴氨酸的一甲基及二甲基化，KDM1A在多種腫瘤組織及細(xì)胞中表達(dá)升高，如前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、結(jié)直腸癌、肺癌及中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。KDM1A可能參與多條信號通路，而影響腫瘤發(fā)生、生長、增殖、侵襲轉(zhuǎn)移、耐藥等多個環(huán)節(jié)。
　　miR-137位于人類1號染色體短臂2區(qū)2帶(1 p22)，有實(shí)驗證實(shí)其可作為一個腫瘤抑制基因在一些腫瘤中發(fā)揮作用

3、。此外miR-137也參與了干細(xì)胞的分化與發(fā)育，神經(jīng)退行性疾病，精神分裂癥、缺血缺氧疾病的病理生理學(xué)改變。miR-137與miR-234同屬于miR-137家族。
　　目的：
　　在組織和細(xì)胞水平探索KDM1A、miR-137的表達(dá)與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;通過RNA干擾技術(shù)抑制KDM1A的表達(dá)，檢測其對胃癌增殖、侵襲、凋亡的影響;并通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測miR-137與KDM1A之間的靶向調(diào)節(jié)關(guān)系。
　　方法：

4、r>　　1、通過western blot技術(shù)檢測24對胃癌及癌旁組織中KDM1A蛋白的表達(dá)，通過實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測24對胃癌組織及癌旁組織中KDM1A mRNA及miR-137的表達(dá)，并分析其與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　2、通過Transwell侵襲實(shí)驗檢測胃癌細(xì)胞株AGS、SGC7901、BGC823及人胚胃上皮細(xì)胞株GES1的侵襲性，同時利用western blot和實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)檢測KDM1A

5、蛋白、KDM1A mRNA、miR-137在各個細(xì)胞株中的表達(dá)，并分析其與胃癌細(xì)胞株侵襲性的相關(guān)關(guān)系。
　　3、利用RNA干擾技術(shù)抑制胃癌細(xì)胞株BGC823中KDM1A的表達(dá)，同時利用MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗、Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗、FCM細(xì)胞凋亡實(shí)驗檢測KDM1A的表達(dá)對胃癌細(xì)胞BGC823增殖、侵襲、凋亡的影響。
　　4、通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測miR-137是否能夠靶向作用于KDM1A mRNA的3'-UTR。

6、r>　　結(jié)果：
　　1、以KDM1A蛋白質(zhì)表達(dá)量、KDM1A mRNA表達(dá)量、miR-137表達(dá)量為因變量，以分類變量T分期、N分期、M分期、G分期、性別、年齡（以50歲為臨界點(diǎn)分為兩組）、HER2免疫組織化學(xué)染色診斷結(jié)果、手術(shù)切除淋巴結(jié)陽性率、組織來源（胃癌組織或癌旁組織）為自變量進(jìn)行線性回歸分析及單因素分析。分析發(fā)現(xiàn)來自T分期晚的胃癌組織中KDM1A蛋白質(zhì)表達(dá)量高;來自T分期晚的胃癌組織中miR-137含量低。N分期、M分期、

7、G分期、HER2免疫組織化學(xué)染色診斷結(jié)果等與組織中KDM1A蛋白質(zhì)含量、KDM1A mRNA含量、miR-137含量之間的線性關(guān)系并不具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、在三株胃癌細(xì)胞(AGS，SGC7901，BGC823)及一株人胚胃上皮細(xì)胞株(GES1)中細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)、KDM1A蛋白表達(dá)量、KDM1AmRNA表達(dá)量、miR-137表達(dá)量之間均存在相關(guān)關(guān)系。穿膜細(xì)胞數(shù)與KDM1A蛋白及mRNA表達(dá)量之間呈正相關(guān);穿膜細(xì)胞數(shù)與miR-13

8、7表達(dá)量之間呈負(fù)相關(guān);KDM1A蛋白及mRNA表達(dá)量與miR-137表達(dá)量之間呈負(fù)相關(guān)。
　　3、合成三段siRNA序列，經(jīng)檢測siRNA-705沉默效率最高。其在體外干擾胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力，并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　4、miR-137能夠特異性結(jié)合于KDM1A mRNA的3'-UTR區(qū)，表觀改變miR-137的表達(dá)量后， KDM1A的表達(dá)隨之改變。miR-137模擬物可降低KDM1A蛋白及mRNA的表達(dá)，miR-1

9、37抑制物可升高KDM1A蛋白及mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1、KDM1A在T分期較晚的胃癌組織中表達(dá)增高，而miR-137表達(dá)降低。KDM1A可能與胃癌的侵襲能力有關(guān)，且miR-137可能通過與KDM1A mRNA特異結(jié)合，從而抑制其轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)。
　　2、在體外實(shí)驗中，KDM1A的表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞的侵襲能力呈正相關(guān)，而miR-137的表達(dá)水平與胃癌細(xì)胞的侵襲能力呈負(fù)相關(guān)。
　　3、在體外實(shí)驗中，si