人PAMM蛋白的原核細(xì)胞表達(dá)、純化及其體外抗炎作用研究.pdf

1、炎癥作為一種常見的疾病嚴(yán)重影響著人們的身體健康。研究發(fā)現(xiàn)，炎癥與動(dòng)脈硬化、癌癥、糖尿病、肥胖等有密切關(guān)系。前期相關(guān)的研究表明，人PAMM蛋白在HEK293和RAW264.7細(xì)胞中的高表達(dá)可明顯增加細(xì)胞內(nèi)GSH/GSSG比率，保護(hù)細(xì)胞免受過(guò)氧化的損傷，提示該蛋白有抑制或減緩炎癥反應(yīng)的功能。
　　為了研究PAMM對(duì)體內(nèi)外各種炎性反應(yīng)的影響，本研究擬構(gòu)建原核表達(dá)體系實(shí)現(xiàn)PAMM蛋白的體外生產(chǎn)，驗(yàn)證其抗炎效果并探討其在預(yù)防和治療炎癥性疾病

2、的作用。我們成功地構(gòu)建了pET28a-Pamm原核表達(dá)載體，并在溫度為16℃，IPTG濃度為0.8 mM的誘導(dǎo)條件下實(shí)現(xiàn)了PAMM在大腸桿菌Rosetta(DE3)的可溶性表達(dá)；經(jīng)鎳柱親和層析純化之后，可得到純度大于90％的PAMM蛋白。
　　純化后的PAMM蛋白用于體外細(xì)胞試驗(yàn)，結(jié)果表明該蛋白可明顯抑制TNF-α、IL-1β和IL-6在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，并可顯著減少IL-6和NO的產(chǎn)生。因此，實(shí)現(xiàn)PAMM蛋白的高效可溶性表達(dá)以及證