二甲雙胍通過下調(diào)STAT3介導(dǎo)的信號通路抑制膀胱腫瘤的侵潤性發(fā)展.pdf

1、第一部分二甲雙胍對膀胱癌細胞系增殖、細胞周期、凋亡、遷移和侵襲的影響
　　目的：
　　探討二甲雙胍對膀胱腫瘤細胞系增殖、細胞周期、凋亡、遷移和侵襲的影響。方法：
　　膀胱腫瘤細胞系T24和J82經(jīng)不同濃度二甲雙胍處理后，分別用CCK8、流式細胞學(xué)技術(shù)、劃痕試驗、transwell檢測并比較不同濃度下增殖、細胞周期、凋亡、遷移和侵襲的情況。
　　結(jié)果：
　　二甲雙胍能夠抑制T24和J82的增殖，其效應(yīng)具有濃度

2、和時間梯度依賴性。二甲雙胍處理后將T24和J82阻滯在細胞周期的G0/G1期。二甲雙胍處理24和48小時后，T24和J82中凋亡的細胞比例明顯升高。T24經(jīng)二甲雙胍處理后，在第12和24小時其轉(zhuǎn)移和侵襲能力均明顯下降。
　　結(jié)論：
　　在體外實驗中，二甲雙胍能夠有效的抑制腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，阻滯腫瘤細胞的細胞周期，誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡。
　　第二部分口服二甲雙胍對大鼠原位膀胱腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響
　　目的：<

3、br>　　在大鼠原位膀胱腫瘤模型上觀察口服二甲雙胍對膀胱腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響。方法：
　　24只280g左右的雌性SD大鼠隨機平均分成3組，對照組不做處理，誘導(dǎo)組給予MNU膀胱灌注誘導(dǎo)成瘤，處理組同時給予誘導(dǎo)成瘤和口服二甲雙胍處理。在第14周時，處死所有大鼠，觀察膀胱內(nèi)腫瘤的生長情況，留取腫瘤組織標(biāo)本，進一步進行病理分析。
　　結(jié)果：
　　14周時，對照組沒有腫瘤形成，誘導(dǎo)組和治療組的腫瘤發(fā)生率分別為100％（8/8）

4、vs87.5%（7/8），平均腫瘤表面積分別為48.84±17.82 mm2（n=8） vs17.5±10.88 mm2（n=7）（P＜0.05），其中侵潤性腫瘤發(fā)生率分別為50%（4/8）vs0%（0/8）（P＜0.05）。結(jié)論：
　　在大鼠原位膀胱腫瘤模型上，口服二甲雙胍能夠顯著抑制膀胱腫瘤由非侵潤性生長向侵潤性生長發(fā)展。
　　第三部分二甲雙胍對膀胱腫瘤STAT3信號通路的影響
　　目的：
　　檢測二甲雙胍對

5、膀胱腫瘤細胞STAT3信號通路的影響。
　　方法：
　　收集大鼠原位膀胱腫瘤模型對照組膀胱組織、誘導(dǎo)組和處理組的腫瘤組織，用western blot檢測磷酸化STAT3、STAT3蛋白水平的差異。二甲雙胍處理T24和J82膀胱腫瘤細胞后，用western blot檢測磷酸化STAT3、STAT3蛋白水平的差異，用免疫熒光技術(shù)檢測磷酸化STAT3蛋白變化和胞內(nèi)定位，用western blot和實時定量PCR檢測STAT3的目的

6、基因cyclin D1、Bcl-2、Bcl-XL轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的變化。結(jié)果：
　　在大鼠原位膀胱腫瘤模型中，腫瘤組織的磷酸化STAT3水平明顯高于正常尿路上皮組織，二甲雙胍處理組的腫瘤組織磷酸化STAT3蛋白水平明顯低于未處理的誘導(dǎo)組。在T24和J82細胞中，細胞核內(nèi)可見較高水平的磷酸化STAT3，二甲雙胍處理后磷酸化STAT3蛋白水平明顯下凋，其下游目的基因cyclin D1、Bcl-2、Bcl-XL在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均有不同程度