CD44與ALDH1真核雙表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建和體外表達(dá).pdf

1、分類號(hào)：R 5 5密 級(jí)：學(xué)位類別： 科學(xué)學(xué)位田 專業(yè)學(xué)位口◇學(xué)校代碼：1006 2學(xué) 號(hào)：2 0 1 1 6 0 2 6 2 2學(xué)科門(mén)類：醫(yī)學(xué)又坪眚科矢號(hào) T l A 咐I 一麓E D I C A l I U 鞠l V E 鸛1 1 r Y碩士學(xué)位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I o N論文題目：C D 4 4 與A L D H l 真核雙表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建和體外表達(dá)T IT L E C O N S

2、T R U C T I o N O F C O ．E X P R E S S I O NP L A S M I D p B u d C E 4 ．1 - C D 4 4 一A L D H lA N D I T S E X P R E S S I O N I N V I T R o一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：內(nèi)科學(xué)血液病學(xué)論文作者：呂艷指導(dǎo)教師：龐華教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一五年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要【目的】本實(shí)驗(yàn)以C

3、D 4 4 及A L D H l 基因及其表達(dá)產(chǎn)物為研究對(duì)象，構(gòu)建真核表達(dá)重組質(zhì)粒p B u d C E 4 ．1 ．C D 4 4 ．A L D H 1 、p B u d C E 4 ．1 ．C D 4 4 、p B u d C E 4 ．1 ．A L D H 1 ，并分別轉(zhuǎn)染M C F ．7 細(xì)胞，觀察實(shí)驗(yàn)各組C D 4 4 及A L D H l 基因和蛋白表達(dá)情況及活性并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用于以C D 4 4 及A L D H l

4、為基礎(chǔ)的腫瘤靶向治療研究，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)提供理論支持。【內(nèi)容】本課題主要由兩部分組成：本文第一部分通過(guò)R T - P C R 方法檢測(cè)三種腫瘤細(xì)胞系M C F ．7 、P C 3 、A 5 4 2 中C D 4 4 及A L D H l 目的基因的表達(dá)情況，依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取合適細(xì)胞作為克隆目的基因片段的來(lái)源，通過(guò)D N A 重組技術(shù)構(gòu)建真核表達(dá)重組質(zhì)粒p B u d C E 4 ．1 一C D 4 4 、p B u d C E 4 ．1

5、．A L D H l 、p B u d C E 4 ．1 ．C D 4 4 ．A L D H l ，并通過(guò)P C R 、酶切、基因測(cè)序方法驗(yàn)證重組質(zhì)粒構(gòu)建是否成功。本文第二部分通過(guò)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染M C F 一7 細(xì)胞，并細(xì)胞分組A ：空白對(duì)照組B ：空質(zhì)粒組C ：p B u d C E 4 ．1 - C D 4 4 轉(zhuǎn)染組D ：p B u d C E 4 ．1 一A L D H l 轉(zhuǎn)染組E ：p B u d C E 4 ．1 ．C D

6、4 4 一A L D H l 轉(zhuǎn)染組，應(yīng)用R T - P C R 及W e s t e m b l o t 檢測(cè)目的基因C D 4 4 及A L D H I 的體外表達(dá)變化：應(yīng)用C C K ．8 法檢測(cè)目的基因C D 4 4與A L D H l 對(duì)細(xì)胞增殖能力影響，M T T 法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞．基質(zhì)粘附能力的影響，并應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析?！痉椒ā? ．M C F ．7 、P C 3 、A 5 4 2 三種腫瘤細(xì)胞系培養(yǎng)，并應(yīng)用R T - P

7、 C R 檢測(cè)三種細(xì)胞系中基因C D 4 4 及A L D H l 的表達(dá)情況。2 ．依據(jù)上步檢測(cè)結(jié)果選取M C F ．7 及A 5 4 2 細(xì)胞系作為外源基因克隆來(lái)源，應(yīng)用R T - P C R 獲得目的基因：含N o t I ／X h o I 酶切位點(diǎn)C D 4 4 轉(zhuǎn)錄子4 及含H i n d l I I ／) ( b a I 酶切位點(diǎn)A L D H l 片段。3 ．利用D N A 重組技術(shù)構(gòu)建真核表達(dá)重組質(zhì)粒p B u d C