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1、目的:本實(shí)驗(yàn)主要構(gòu)建pcDNA4/His/Max-YH1和mu6Pro-YH1的siRNA真核表達(dá)質(zhì)粒，為后續(xù)建立高表達(dá)和無(wú)或低表達(dá)YH1的穩(wěn)定細(xì)胞株提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為深入研究YH1基因在鼻咽癌發(fā)生的分子機(jī)制中的作用邁出重要的第一步。 方法:(1)pcDNA4/His/Max-YH1質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定：首先從人鼻咽組織中提取組織RNA，以RNA為模板，用所設(shè)計(jì)的帶有EcoRⅠ、XbaⅠ雙酶切位點(diǎn)的特異性引物進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增出目的
2、YHl基因，進(jìn)行回收、純化；其次將純化的YH1基因連接到pMD18-T載體上，得到T/A克隆產(chǎn)物，用藍(lán)白篩選進(jìn)行初篩，再用菌液PCR進(jìn)一步篩選，篩選得到的陽(yáng)性菌液測(cè)序，將測(cè)序正確的pMD18-T-YH1重組質(zhì)粒與pcDNA4/His/Max質(zhì)粒分別進(jìn)行雙酶切、連接、陽(yáng)性鑒定、測(cè)序；最后將測(cè)序的結(jié)果與GenBank中YH1的cDNA序列進(jìn)行比對(duì)。 (2)SiRNA-YH1真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定：首先根據(jù)siRNA設(shè)計(jì)原則針對(duì)YH
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