失神經(jīng)對大鼠牙周組織缺損愈合的影響及機制初探.pdf

1、背景和目的:
　　 牙周病是口腔中兩大主要疾病之一，其發(fā)病率較高并且較難控制，也是牙齒缺失的主要原因。特征性表現(xiàn)為牙齦的炎癥、牙周袋的形成、牙槽骨出現(xiàn)不同程度的吸收以造成牙齒松動脫落。目前所追求的牙周病治療最終目的不僅是去除病因，阻止疾病的進展，更重要的是如何使病變破壞的牙周組織再生并行使其功能，縱然目前對牙周組織再生的研究較為熱門，但是仍未達到滿意的效果。
　　 近年來在牙周組織再生領(lǐng)域的研究中，針對組織工程中材料支架

2、，種子細胞和生長因子的研究較為熱門，同時基因工程與組織工程的結(jié)合性研究也開始漸漸的深入，但是其研究所取得的結(jié)果并未達到我們所追求的牙周組織再生目標。牙周組織再生過程中細胞分泌的生長因子對周圍基質(zhì)的合成固然重要，但是組織基質(zhì)的神經(jīng)化，組織基質(zhì)的感覺神經(jīng)化在維持其功能中的作用是不可忽視的，神經(jīng)的支配和調(diào)節(jié)作用在牙周組織再生過程中的作用一直未被重視。神經(jīng)系統(tǒng)在牙周組織中具有傳導(dǎo)疼痛和感受壓力的作用，但是除了其基本的神經(jīng)傳導(dǎo)作用以外，其分泌的各

3、種功能性神經(jīng)肽對維持牙周組織微環(huán)境的動態(tài)平衡也具有不可忽視的意義。目前通過體外的相關(guān)研究證實神經(jīng)系統(tǒng)可以通過介導(dǎo)成骨細胞和破骨細胞的活性從而參與調(diào)節(jié)骨代謝，在骨的修復(fù)改建過程中起著關(guān)鍵性的作用[1,2]。神經(jīng)系統(tǒng)能夠在不同水平上參與骨創(chuàng)傷的愈合修復(fù)和重塑，感覺神經(jīng)能夠通過成骨細胞細胞膜上的神經(jīng)遞質(zhì)受體作用，直接調(diào)節(jié)成骨細胞的生物學(xué)活性和免疫應(yīng)答反應(yīng)，也可以間接調(diào)控成骨細胞的生物學(xué)活性從而影響骨創(chuàng)傷愈合速度和質(zhì)量。同時在體外實驗研究中部分

4、神經(jīng)肽物質(zhì)的促成骨作用已經(jīng)得到證實[3]。降鈣素基因相關(guān)肽(calcitoningenerelatedpeptideCGRP)是骨組織中分布較為廣泛的一種感覺性功能神經(jīng)肽，最早為Hukkanen在大鼠骨折模型實驗過程中發(fā)現(xiàn)的，其發(fā)現(xiàn)在新生骨組織中有CGRP免疫組織染色陽性纖維的長入[4]，隨后CGRP的作用及機制成為研究骨折愈合改建的熱點，同時在消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和疼痛傳導(dǎo)機制的調(diào)控中成為較為熱門的研究課題。
　　 相關(guān)研究顯

5、示CGRP的陽性神經(jīng)纖維在頜骨及其骨膜中均有分布，推測其參與了生長發(fā)育期的頜骨生長形成和后期的修復(fù)改建過程[5,6]。近期研究顯示，CGRP在牙周組織中也有較為廣泛的分布，通過免疫組織化染色發(fā)現(xiàn)，CGRP主要分布于牙周膜的成纖維細胞以及牙槽骨中的血管周圍，說明其在牙周組織的穩(wěn)態(tài)維持和生理功能過程中可能具有一定的調(diào)控意義，尤其在牙槽骨的改建過程中。在口腔外科的研究中，針對CGRP在骨折愈合的研究較為廣泛，研究顯示CGRP可以促進下頜骨骨折

6、的愈合[7]。在正畸醫(yī)學(xué)研究中，CGRP對正畸牙齒移動過程中牙槽骨的改建和重塑具有一定的調(diào)節(jié)作用。鑒于以上實驗和理論基礎(chǔ)，我們推測CGRP在牙周組織再生過程中也可能具不可忽視的意義。為了探討CGRP在牙周組織再生過程中的作用，本實驗設(shè)計了一種切斷或保留大鼠下牙槽神經(jīng)伴牙周缺損的動物模型，并在此基礎(chǔ)上研究CGRP在牙周組織再生過程中的作用。
　　 方法:
　　 1、失下牙槽神經(jīng)后大鼠牙周組織中CGRP的表達變化實驗研究

7、r>　　 建立切斷大鼠下牙槽神經(jīng)的動物模型，左側(cè)離斷神經(jīng)為實驗組，對側(cè)保留神經(jīng)為對照組，分為五組即3天、7天、14天、21天、28天。采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測大鼠牙周組織中CGRP以及SP的表達變化
　　 2、失下牙槽神經(jīng)對大鼠牙周組織缺損愈合影響的組織學(xué)觀察
　　 通過口外入路建立切斷大鼠下牙槽神經(jīng)伴牙周缺損模型，左側(cè)切斷大鼠下牙槽神經(jīng)伴牙周缺損為實驗組，對側(cè)保留神經(jīng)僅做牙周缺損為對照組。分為五組即1周、2周、

8、4周、6周和8周。利用HE，Masson染色觀察研究失神經(jīng)后牙周組織缺損愈合的修復(fù)效果，通過免疫組織化學(xué)染色的方法觀察CGRP和OPG/RANKL的表達變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、失下牙槽神經(jīng)后大鼠牙周組織中CGRP的表達變化實驗研究
　　 免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示失神經(jīng)后牙周組織中的CGRP和SP呈現(xiàn)先降低后上升至正常水平的趨勢。利用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析顯示3天、7天和14天組與對照組有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜

9、0.05)。
　　 2、失下牙槽神經(jīng)對大鼠牙周組織缺損愈合影響的組織學(xué)觀察
　　 通過HE、masson染色以及免疫組織化學(xué)染色等檢測方法以及利用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析顯示牙周組織再生過程中實驗組新生骨的礦化程度比對照組低，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，實驗組與對照組新生骨組織中CGRP的表達具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。缺損區(qū)OPG/RANKL值變化與CGRP變化趨勢相同。
　　 結(jié)論: