失神經(jīng)對(duì)大鼠牙周組織缺損愈合的影響及機(jī)制初探.pdf

1、背景和目的:
　　 牙周病是口腔中兩大主要疾病之一，其發(fā)病率較高并且較難控制，也是牙齒缺失的主要原因。特征性表現(xiàn)為牙齦的炎癥、牙周袋的形成、牙槽骨出現(xiàn)不同程度的吸收以造成牙齒松動(dòng)脫落。目前所追求的牙周病治療最終目的不僅是去除病因，阻止疾病的進(jìn)展，更重要的是如何使病變破壞的牙周組織再生并行使其功能，縱然目前對(duì)牙周組織再生的研究較為熱門，但是仍未達(dá)到滿意的效果。
　　 近年來在牙周組織再生領(lǐng)域的研究中，針對(duì)組織工程中材料支架

2、，種子細(xì)胞和生長因子的研究較為熱門，同時(shí)基因工程與組織工程的結(jié)合性研究也開始漸漸的深入，但是其研究所取得的結(jié)果并未達(dá)到我們所追求的牙周組織再生目標(biāo)。牙周組織再生過程中細(xì)胞分泌的生長因子對(duì)周圍基質(zhì)的合成固然重要，但是組織基質(zhì)的神經(jīng)化，組織基質(zhì)的感覺神經(jīng)化在維持其功能中的作用是不可忽視的，神經(jīng)的支配和調(diào)節(jié)作用在牙周組織再生過程中的作用一直未被重視。神經(jīng)系統(tǒng)在牙周組織中具有傳導(dǎo)疼痛和感受壓力的作用，但是除了其基本的神經(jīng)傳導(dǎo)作用以外，其分泌的各

3、種功能性神經(jīng)肽對(duì)維持牙周組織微環(huán)境的動(dòng)態(tài)平衡也具有不可忽視的意義。目前通過體外的相關(guān)研究證實(shí)神經(jīng)系統(tǒng)可以通過介導(dǎo)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的活性從而參與調(diào)節(jié)骨代謝，在骨的修復(fù)改建過程中起著關(guān)鍵性的作用[1,2]。神經(jīng)系統(tǒng)能夠在不同水平上參與骨創(chuàng)傷的愈合修復(fù)和重塑，感覺神經(jīng)能夠通過成骨細(xì)胞細(xì)胞膜上的神經(jīng)遞質(zhì)受體作用，直接調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的生物學(xué)活性和免疫應(yīng)答反應(yīng)，也可以間接調(diào)控成骨細(xì)胞的生物學(xué)活性從而影響骨創(chuàng)傷愈合速度和質(zhì)量。同時(shí)在體外實(shí)驗(yàn)研究中部分

4、神經(jīng)肽物質(zhì)的促成骨作用已經(jīng)得到證實(shí)[3]。降鈣素基因相關(guān)肽(calcitoningenerelatedpeptideCGRP)是骨組織中分布較為廣泛的一種感覺性功能神經(jīng)肽，最早為Hukkanen在大鼠骨折模型實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)的，其發(fā)現(xiàn)在新生骨組織中有CGRP免疫組織染色陽性纖維的長入[4]，隨后CGRP的作用及機(jī)制成為研究骨折愈合改建的熱點(diǎn)，同時(shí)在消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和疼痛傳導(dǎo)機(jī)制的調(diào)控中成為較為熱門的研究課題。
　　 相關(guān)研究顯

5、示CGRP的陽性神經(jīng)纖維在頜骨及其骨膜中均有分布，推測(cè)其參與了生長發(fā)育期的頜骨生長形成和后期的修復(fù)改建過程[5,6]。近期研究顯示，CGRP在牙周組織中也有較為廣泛的分布，通過免疫組織化染色發(fā)現(xiàn)，CGRP主要分布于牙周膜的成纖維細(xì)胞以及牙槽骨中的血管周圍，說明其在牙周組織的穩(wěn)態(tài)維持和生理功能過程中可能具有一定的調(diào)控意義，尤其在牙槽骨的改建過程中。在口腔外科的研究中，針對(duì)CGRP在骨折愈合的研究較為廣泛，研究顯示CGRP可以促進(jìn)下頜骨骨折

6、的愈合[7]。在正畸醫(yī)學(xué)研究中，CGRP對(duì)正畸牙齒移動(dòng)過程中牙槽骨的改建和重塑具有一定的調(diào)節(jié)作用。鑒于以上實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)，我們推測(cè)CGRP在牙周組織再生過程中也可能具不可忽視的意義。為了探討CGRP在牙周組織再生過程中的作用，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了一種切斷或保留大鼠下牙槽神經(jīng)伴牙周缺損的動(dòng)物模型，并在此基礎(chǔ)上研究CGRP在牙周組織再生過程中的作用。
　　 方法:
　　 1、失下牙槽神經(jīng)后大鼠牙周組織中CGRP的表達(dá)變化實(shí)驗(yàn)研究

7、r>　　 建立切斷大鼠下牙槽神經(jīng)的動(dòng)物模型，左側(cè)離斷神經(jīng)為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)側(cè)保留神經(jīng)為對(duì)照組，分為五組即3天、7天、14天、21天、28天。采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)大鼠牙周組織中CGRP以及SP的表達(dá)變化
　　 2、失下牙槽神經(jīng)對(duì)大鼠牙周組織缺損愈合影響的組織學(xué)觀察
　　 通過口外入路建立切斷大鼠下牙槽神經(jīng)伴牙周缺損模型，左側(cè)切斷大鼠下牙槽神經(jīng)伴牙周缺損為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)側(cè)保留神經(jīng)僅做牙周缺損為對(duì)照組。分為五組即1周、2周、

8、4周、6周和8周。利用HE，Masson染色觀察研究失神經(jīng)后牙周組織缺損愈合的修復(fù)效果，通過免疫組織化學(xué)染色的方法觀察CGRP和OPG/RANKL的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、失下牙槽神經(jīng)后大鼠牙周組織中CGRP的表達(dá)變化實(shí)驗(yàn)研究
　　 免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示失神經(jīng)后牙周組織中的CGRP和SP呈現(xiàn)先降低后上升至正常水平的趨勢(shì)。利用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析顯示3天、7天和14天組與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜

9、0.05)。
　　 2、失下牙槽神經(jīng)對(duì)大鼠牙周組織缺損愈合影響的組織學(xué)觀察
　　 通過HE、masson染色以及免疫組織化學(xué)染色等檢測(cè)方法以及利用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析顯示牙周組織再生過程中實(shí)驗(yàn)組新生骨的礦化程度比對(duì)照組低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組新生骨組織中CGRP的表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。缺損區(qū)OPG/RANKL值變化與CGRP變化趨勢(shì)相同。
　　 結(jié)論: