絲裂原細(xì)胞外信號(hào)反應(yīng)激酶阻斷劑對(duì)缺氧誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、人視網(wǎng)膜色素上皮(retinalpigmentepithelium，RPE)細(xì)胞為位于視網(wǎng)膜感光細(xì)胞和脈絡(luò)膜血管之間的單層細(xì)胞，正常情況下RPE細(xì)胞既不增殖也不遷移，而在病理情況下，具有游走、分泌、增殖和轉(zhuǎn)化的潛能，RPE與許多眼科疾病的發(fā)生有關(guān)，如增殖性玻璃體視網(wǎng)膜疾病、視網(wǎng)膜新生血管性疾病、年齡相關(guān)性黃斑變性等。這些疾病的發(fā)生均可導(dǎo)致病人的視功能下降，影響病人生活質(zhì)量。 目的：探討特異性絲裂原細(xì)胞外信號(hào)反應(yīng)激酶Ⅰ(MEKI)

2、阻斷劑(PD98059)對(duì)缺氧刺激的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖的影響，并初步探討其作用機(jī)制。 方法：利用95﹪N2和5﹪C02混合氣體建立培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞缺氧模型，用三種不同濃度的P42/P44MAPK特異性阻斷劑PD98059處理RPE細(xì)胞，在缺氧24小時(shí)后用MTT的方法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況，用RT-PCR的方法檢測(cè)周期蛋白D的mRNA的表達(dá)，并收集細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀的檢測(cè)，判斷細(xì)胞的周期情況，用Westernblot檢測(cè)ERK

3、與磷酸化ERK的蛋白濃度 結(jié)果：(1)P42/P44MAPK途徑抑制劑對(duì)RPE細(xì)胞的影響：缺氧組RPE細(xì)胞的數(shù)量與正常組相比明顯增加(P≤0.05)；P42/P44MAPK途徑抑制劑可以抑制RPE細(xì)胞的增殖，并且具有濃度依賴性。 (2)P42/P44MAPK途徑抑制劑對(duì)CyclinD的影響：缺氧組CyclinD較正常組明顯增加(P≤0.05)；P42/P44MAPK途徑抑制劑對(duì)CyclinD的mRNA有抑制作用，并具有濃

4、度依賴性。 (3)P42/P44MAPK途徑抑制劑對(duì)RPE細(xì)胞周期的影響：缺氧組G1期細(xì)胞明顯增多，加入P42/P44MAPK途徑抑制劑后G1期細(xì)胞明顯增加，且具有濃度依賴性。 (4)P42/P44MAPK途徑抑制劑對(duì)ERK蛋白的影響：缺氧對(duì)ERK的蛋白表達(dá)沒有明顯影響，但是可以增加P-ERK的蛋白表達(dá)；P42/P44MAPK途徑抑制劑對(duì)ERK蛋白表達(dá)沒有明顯影響，對(duì)于P-ERK具有抑制作用，并具有濃度依賴性。