地塞米松及曲安奈德對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞活性及VEGF表達的影響.pdf

1、目的:為觀察不同濃度地塞米松(dexamethasoneDEX)及曲安奈德(triamcinoloneacetonideTA)對體外正常和缺氧培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelialhRPE)細胞生長及血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactorVEGF)表達的影響。 方法:為人視網(wǎng)膜色素上皮細胞細胞株(hRPE-19)，體外培養(yǎng)，第一部分加入地塞米松

2、濃度分別為1、10、50、100、200、400μg/ml，使用不加藥普通培養(yǎng)液為空白對照，分別給予正常(95﹪O2,5﹪CO2)及缺氧(2-5﹪O2,95﹪CO2及N2混合氣體)條件培養(yǎng)24小時。用四唑溴鹽(MTT)和RT-PCR的方法，分別檢測細胞增殖率和細胞VEGF的表達。 第二部分加入曲安奈德濃度分別為10、100、400、800、1600μg/ml，使用不加藥普通培養(yǎng)液為空白對照，分別給予正常(95﹪O2,5﹪CO2)

3、及缺氧(2-5﹪O2,95﹪CO2及N2混合氣體)條件培養(yǎng)24小時。用四唑溴鹽(MTT)和RT-PCR的方法，分別檢測細胞活性和細胞VEGF的表達。數(shù)據(jù)采用獨立樣本T檢驗及方差分析方法，進行統(tǒng)計。 第一部分地塞米松實驗中，MTT結(jié)果顯示同一藥物濃度下，缺氧組細胞較有氧組A(吸光度)值明顯增高(P＜0.01)。有氧組，1μg/ml組與對照組相比，差異未見顯著性；10-200μg/ml濃度組，細胞增殖率增加，但200μg/ml組較1

4、00μg/ml組細胞增殖有減弱趨勢，400μg/ml濃度組，細胞生長較對照組呈現(xiàn)抑制狀態(tài)(P＜0.05)。缺氧組，1-200μg/ml濃度促進細胞增殖，400μh/ml濃度時細胞生長呈現(xiàn)抑制狀態(tài)(P＜0.05)。在有氧及缺氧組中，在1-200μg/ml低濃度各組之間，進行兩兩比較，差異未見顯著性(P＞0.05)。RT-PCR結(jié)果可見各藥物濃度組在有氧及缺氧情況下，β-actin表達相當，VEGF表達表現(xiàn)為200μg/ml濃度之內(nèi)表達增強

5、，400μg/ml濃度時表達明顯下降。經(jīng)Gelpro軟件掃描，SPSS軟件分析，同一藥物濃度，缺氧組較有氧組細胞VEGF表達增強(P＜0.05)；1-200μg/ml，VEGF表達增強，其中100μg/ml組處于VEGF表達的峰值，各組與對照組相比差異顯著，結(jié)果有顯著性(P＜0.05)，400μg/ml組VEGF表達較對照組明顯減少(P＜0.05)。 第二部分曲安奈德實驗中，MTT結(jié)果顯示，在同一藥物濃度，缺氧組A值與有氧組A值

6、比較差異有顯著性(p＜0.01)；在有氧及缺氧情況下，曲安奈德在100μg/ml之內(nèi)低濃度下對細胞生長影響不著，在400μg/ml以上濃度，抑制細胞生長，且800μG/ml組以上高濃度抑制作用明顯。細胞存活率測定為100、400、800、1600μg/ml組有氧組細胞存活率分別為94.39﹪、84.49﹪、68.27﹪和9.1﹪，缺氧組分別為98.70﹪、85.44﹪、80.22﹪和23.94﹪。RT-PCR結(jié)果顯示，在有氧組及缺氧組，

7、β-actin各濃度表達相當，而VEGF在各濃度有差異，經(jīng)Gelpro軟件掃描，SPSS軟件分析，在10μg/ml組，VEGF表達較對照組明顯增高(p＜0.05)，在100μg/ml以上濃度，曲安奈德對RPE細胞VEGF表達抑制作用明顯(p＜0.01)。 本研究發(fā)現(xiàn)：缺氧情況下，細胞增殖明顯增加，且表達VEGF增強。對于不同藥物濃度組，地塞米松在低濃度可促進細胞生長，表達VEGF增強，在高濃度可抑制細胞生長，表達VEGF減少。曲