神經(jīng)酰胺調(diào)節(jié)酒精誘導(dǎo)小鼠神經(jīng)細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、社會(huì)交流的頻繁，酒精類(lèi)飲料已逐漸成為人們常見(jiàn)的飲品之一；自1899年德國(guó)醫(yī)生William Sullivan發(fā)現(xiàn)孕婦飲酒會(huì)影響胎兒以來(lái)，酒精對(duì)胎兒的毒理作用逐漸引起人們的關(guān)注。科學(xué)家們研究發(fā)現(xiàn)，酒精不僅影響胎兒生長(zhǎng)發(fā)育，引成各臟器的畸形，而且嚴(yán)重?fù)p害胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育。酒精可通過(guò)多種途徑作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，多引起神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生程序性凋亡或自噬增加，造成神經(jīng)細(xì)胞暫時(shí)性功能缺失，常見(jiàn)神經(jīng)損傷部位包括海馬和小腦，其中小腦

2、受損將引起共濟(jì)失調(diào)，而海馬神經(jīng)細(xì)胞缺失會(huì)引起近記憶喪失、認(rèn)知障礙等。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，酒精可影響神經(jīng)細(xì)胞的增殖，但其具體機(jī)制尚不十分清楚。我們利用神經(jīng)鞘磷脂合成酶
　　 2基因敲除(sphingomyelin synthase2 knockout，SMS2-/-)小鼠建立孕期酒精暴露模型，試圖從神經(jīng)酰胺途徑進(jìn)一步研究酒精的神經(jīng)毒理作用及其機(jī)制，為探討酒精暴露、神經(jīng)酰胺以及神經(jīng)細(xì)胞增殖三者之間的相互聯(lián)系提供理論依據(jù)，并為治療和預(yù)防神

3、經(jīng)系統(tǒng)疾病引起的神經(jīng)損傷提供新的治療方略及方法。
　　 目的:
　　 探討神經(jīng)酰胺在酒精誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞增殖及新生神經(jīng)元形成過(guò)程中的作用及其作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 利用SMS2-/-小鼠建立孕期酒精暴露模型，用酶學(xué)法檢測(cè)P0仔鼠血清神經(jīng)鞘磷脂(sphingomyelin，SM)水平，利用免疫熒光染色法觀察各分組仔鼠齒狀回神經(jīng)細(xì)胞增殖、新生神經(jīng)元及PKCα在腦組織中的表達(dá)，免疫印跡技術(shù)檢測(cè)P7仔鼠海馬組

4、織PKCα蛋白的相對(duì)表達(dá)量。
　　 結(jié)果:
　　 1．由于SMS2基因的缺失，SMS2-/-仔鼠血清SM水平明顯低于野生型(Wildtype，WT)仔鼠(P＜0.01)；無(wú)論是SMS2-/-仔鼠還是WT仔鼠，酒精暴露后其血清SM水平降低(P＜0.05)且具有劑量依賴(lài)性(P＜0，05)。
　　 2.無(wú)論是SMS2-/-仔鼠還是WT仔鼠，其齒狀回神經(jīng)細(xì)胞增殖的數(shù)量及新生神經(jīng)元隨年齡的增長(zhǎng)而減少且一直持續(xù)到成年；與WT

5、仔鼠相比，SMS2-/-仔鼠齒狀回神經(jīng)細(xì)胞增殖的數(shù)量及新生神經(jīng)元較多(P＜0.05)；酒精暴露后，兩基因組仔鼠齒狀回神經(jīng)細(xì)胞增殖的數(shù)量及新生神經(jīng)元隨酒精劑量的增加而增多且酒精組明顯多于對(duì)照組(P＜0.01)，高劑量組多于低劑量組(P＜0.05)，存在劑量依賴(lài)性。
　　 3.PKCα是C1P通路中重要的激活蛋白，其主要表達(dá)于胞膜，在海馬、齒狀回、腦皮質(zhì)中均有表達(dá)；與WT仔鼠相比，SMS2-/-仔鼠海馬組織PKCα蛋白的表達(dá)量較低(

6、P＜0.05)；酒精暴露后，兩基因組仔鼠海馬組織PKCα蛋白的表達(dá)量隨酒精劑量的增加而增高(P＜0.05)且具有劑量依賴(lài)性。
　　 結(jié)論:
　　 SMS2基因的缺失使血清SM水平降低，可導(dǎo)致神經(jīng)酰胺在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)蓄積；孕期酒精暴露能夠誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生代償性增殖及新生神經(jīng)元的形成，神經(jīng)酰胺通路參與酒精誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的過(guò)程；同時(shí)，PKCα是Cer-C1P級(jí)聯(lián)反應(yīng)中重要的激活蛋白，可上調(diào)神經(jīng)酰胺調(diào)控酒精誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞增殖及新生神經(jīng)元