骨髓增生異常綜合征患者RIZ1基因表達(dá)及其啟動(dòng)子甲基化研究.pdf

1、研究目的：
　　 1.分析骨髓增生異常綜合征(MDS)不同亞型及不同危險(xiǎn)度患者中RIZ1基因表達(dá)的狀況及其與臨床特征的相關(guān)性；
　　 2.分析骨髓增生異常綜合征(MDS)不同亞型及不同危險(xiǎn)度患者中的RIZ1基因的甲基化狀態(tài)及其與臨床特征的相關(guān)性；
　　 3.探討RlZ1基因的表達(dá)與其啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)相關(guān)性及其與骨髓增生異常綜合征(MDS)的發(fā)病機(jī)制的相關(guān)性。
　　 研究方法：
　　 1.選取46例

2、初發(fā)MDS患者以及10例健康人作為研究對(duì)象。所有MDS患者均為我院門診和住院患者，其中男性33例，女性13例，中位年齡16-83歲；10例健康人作為對(duì)照。根據(jù)WHO診斷及分型標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)所有患者進(jìn)行分類：包括難治性貧血／難治性貧血伴有環(huán)狀鐵粒幼細(xì)胞／難治性血細(xì)胞減少伴有多系發(fā)育異常（RA/RARS/RCMD）17例、難治性貧血伴有原始細(xì)胞過(guò)多-Ⅰ（RAEB-Ⅰ）9例、難治性貧血伴有原始細(xì)胞過(guò)多-Ⅱ(RAEB-Ⅱ)14例、MDS轉(zhuǎn)變成急性白血

3、病(MDS/AML)6例。依照國(guó)際預(yù)后積分系統(tǒng)(IPSS)（骨髓原始細(xì)胞比例、染色體核型異常、細(xì)胞數(shù)減少的造血細(xì)胞系數(shù)目）標(biāo)準(zhǔn)，將所有患者分為低危組（0分）9例、中危-1組（0.5-1.0分）19例，中危-2組（1.5-2.0分）10例和高危組（≥2.5分）8例。
　　 2.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR)方法檢測(cè)MDS不同亞型及不同危險(xiǎn)度分級(jí)的患者與健康入骨髓標(biāo)本

4、中RIZI基因mRNA的表達(dá)狀況。
　　 3.應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylationspecificPCR，MSP)方法檢測(cè)MDS不同亞型及不同危險(xiǎn)度分級(jí)的患者與健康人骨髓標(biāo)本RIZ1基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)。
　　 4.采用R顯帶技術(shù)檢測(cè)MDS患者骨髓標(biāo)本中染色體的核型。
　　 結(jié)果：
　　 1.骨髓增生異常綜合征(MDS)患者、健康對(duì)照組骨髓細(xì)胞中RIZ1基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的中位數(shù)分別為0.5

5、571(0.3335，0.8147)，1.0034(0.9201、1.4517)。與健康對(duì)照相比，骨髓增生異常綜合征患者中的RIZ1mRNA表達(dá)量下降，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜O.001），其中78％(36/46)的骨髓增生異常綜合征(MDS)患者中該基因表達(dá)下降。依照WHO分型，RA/RARS/RCMD0.7453(0.5170,1.1446)、RAEB-I0.6025(0.2693,07565)，RAEB-Ⅱ0.3664(0.2535

6、，0.7697)、MDS/AML0.3516(0.2788，0.5764)各亞型分組中的mRNA的表達(dá)水平與健康對(duì)照組相比，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值分別為：0.013，0.001，＜0.001，＜0.001)。其中RA/RARS/RCMD0.7453(0.5170,1.1446)與RAEB-Ⅱ0.3664(0.2530，0.7697)、MDS/AML0.3516(0.2788，0.5764)相比，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值分別為：0.017、

7、0.036）。依照國(guó)際預(yù)后積分系統(tǒng)(IPSS):低危、中危-1、中危-2及高危患者中的RIZlmRNA的表達(dá)水平分別為0.7795(0.6358，1.0371)，0.5600(0.3645、0.9314)，0.4990(0.2603、0.7697)，0.3255(0.2293、0.4170)均較健康對(duì)照組表達(dá)量下降，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值分別為：0.040，0.001，＜0.001，＜0.001）。其中低危組的表達(dá)水平與高危組相比，具有

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=O.011）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析RIZ1基因的表達(dá)水平與年齡、性別、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)及染色體核型無(wú)相關(guān)性。
　　 2.采用甲基化特異性PCR技術(shù)對(duì)30例骨髓增生異常綜合征(MDS)患者和10例健康對(duì)照組骨髓中RIZ1基因進(jìn)行分析，有11例出現(xiàn)甲基化，甲基化率為37％(11/30)，正常對(duì)照組中均為非甲基化。依照WHO分型標(biāo)準(zhǔn)，RA/RARS/RCMD11例，RAEB-Ⅰ8例，RAEB-Ⅱ7例、MD

9、S/AML4例，甲基化率分別為18.1％、37.5％、42.9％、75.0％。依照國(guó)際預(yù)后積分系統(tǒng)(IPSS)，包括低危組6例、中危-1組12例、中危-2組7例和高危組5例，甲基化率分別為16.7％、25.0％、57.1％、60.0％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，RIZ1啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)在不同亞型及不同危險(xiǎn)度分級(jí)差異均未見(jiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值分別為0.226、0.237）。該基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)與年齡、性別、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)

10、及染色體核型無(wú)相關(guān)性。
　　 3.30例骨髓增生異常綜合征(MDS)患者中有22例RIZ1基因表達(dá)降低，其中這22例中有11例伴有啟動(dòng)子區(qū)甲基化，甲基化率為50％，在11例RIZ1啟動(dòng)子甲基化MDS患者的骨髓標(biāo)本中的RIZ1基因相對(duì)表達(dá)量的中位數(shù)為0.3347(0.2062，0.3553)，在未發(fā)生RIZ1啟動(dòng)子甲基化的19例患者中RIZI基因的表達(dá)量的中位數(shù)為0.7664(0.5599，1.1489)，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0

11、.001），表明發(fā)生啟動(dòng)子甲基化的MDS患者的骨髓細(xì)胞中RIZI的表達(dá)量低于啟動(dòng)子未發(fā)生甲基化的患者。
　　 結(jié)論：
　　 1.骨髓增生異常綜合征(MDS)患者中RlZ1mRNA表達(dá)水平下降較常見(jiàn)，且在不同的亞型及不同危險(xiǎn)度分級(jí)中表達(dá)存在差異，提示該基因可能參與MDS的發(fā)病，并與疾病的進(jìn)展有關(guān)。
　　 2.骨髓增生異常綜合征(MDS)中存在RIZ1基因啟動(dòng)子甲基化現(xiàn)象，且在不同亞型及不同危險(xiǎn)度分級(jí)中甲基化率不同，