雌激素介導(dǎo)內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)損傷血管內(nèi)皮研究.pdf

1、1．背景與目的： 動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是動(dòng)脈的一種非炎癥性、退行性和增生性的病變，可引起動(dòng)脈壁增厚、管腔狹窄。AS起病隱匿，發(fā)病率高，可最終造成心肌梗死、腦血栓、下肢壞死等嚴(yán)重后果，不僅嚴(yán)重危害了人民群眾的生命健康，還導(dǎo)致醫(yī)學(xué)資源持續(xù)消耗，龐大的醫(yī)療費(fèi)用已成為國家、社會(huì)和家庭的沉重負(fù)擔(dān)。研究AS發(fā)病機(jī)制及其防治措施不僅具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值，還能產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，必將在未來的生命科學(xué)臨域占有重

2、要的地位。 2．方法 2．1 EPCs培養(yǎng)、鑒定密度梯度 離心法獲取小鼠骨髓及脾臟單個(gè)核細(xì)胞，在添加50ng/ml VEGF及其它生長(zhǎng)因子的DMEM培養(yǎng)液中常規(guī)培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)、形態(tài)學(xué)變化；UEA-I結(jié)合和DiI-LDL攝取實(shí)驗(yàn)觀察EPCs是否具有內(nèi)皮細(xì)胞功能特性：CD31、eNOS免疫組化及Sca-1、VEGFR-2流式鑒定是否具有內(nèi)皮細(xì)胞表型；透射電鏡觀察是否具有內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)； 2．

3、2觀察雌激素對(duì)EPCs部分生物學(xué)功能的影響 EPCs經(jīng)無酚紅無血清培養(yǎng)同步化后，加入17β一雌二醇，使終濃度分別為0.01、0.1、1μmol/L，改良Boyden小室、四唑鹽比色法、人工計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞儀觀察EPCs分化、增殖、遷移、黏附、凋亡及血管新生能力的變化。 2．3探討ERs/P13K/Akt信號(hào)通路在雌激素介導(dǎo)EPCs生物學(xué)功能變化中的作用 RT-PCR、免疫組化及westernblot明確EPCs是否

4、表達(dá)ERs；給予雌激素受體拮抗劑ICI1 82780及P13K信號(hào)通路阻斷劑LY294002，觀察二者在雌激素介導(dǎo)EPCs遷移及增殖中的作用；westemblot觀察雌激素受體拮抗劑及P13K信號(hào)通路阻斷劑對(duì)雌激素介導(dǎo)Akt蛋白磷酸化的影響。 2．4雌激素促進(jìn)損傷血管內(nèi)皮修復(fù)的在體研究。 3．結(jié)果 3．1．EPCs培養(yǎng)鑒定。 3．2雌激素對(duì)EPCs部分生物學(xué)功能的影響。 3．3 ERs/P13K/

5、Akt信號(hào)通路在雌激素介導(dǎo)EPCs遷移及增殖中的作用。 3．4雌激素促進(jìn)EPCs動(dòng)員及損傷血管內(nèi)皮修復(fù)的在體研究。 頸動(dòng)脈損傷后1，3天各組外周血EPCs數(shù)量分別為，卵巢切除+雌激素組(0.42±0.135％，n=6；1.47±0.38％，n=5)、卵巢切除組(0.13±0.024％，n=6；0.25±0.024％，n=6)、未切除卵巢組(0.43±0.16％，n=6；0.65±0.21％，n=4)、卵巢切除+雌激素+L

6、Y組(0.12±0.019％，n=6；0.25±0.062％，n=6)及卵巢切除+雌激素+ICI組(0.12±0.019％，n=6：0.24±0.067％，n=6)； 4．結(jié)論 4．1小鼠骨髓及脾臟中含有EPCs，在一定的培養(yǎng)條件下，可向內(nèi)皮樣細(xì)胞分化； 4．2雌激素可促進(jìn)EPCs增殖、遷移、黏附和血管新生，抑制其凋亡； 4．3小鼠EPCs表達(dá)ERα及β受體，位于胞核及胞漿；雌激素可能通過ERs/P13K