UPLc-MS快速測定血清1，5-脫水葡萄糖醇方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、在臨床糖尿病(DM)診斷中，評(píng)估血糖控制的常規(guī)方法，如糖化血紅蛋白(HbA1c)或自我血糖監(jiān)測(SMBG)，專注于監(jiān)控時(shí)間段內(nèi)平均血糖或空腹血糖水平，而忽略了血糖波動(dòng)情況，對(duì)于糖尿病血糖控制與治療來說這是一種缺陷[1～3]。因此，需要尋找其他的監(jiān)測血糖的方法來完善對(duì)血糖的監(jiān)測。
　　1，5-脫水葡萄糖醇(1，5-anhydroglucitol，1，5-AG)是一種重要的人血清多元醇，其結(jié)構(gòu)類似于D-葡萄糖，在體內(nèi)的平衡可以由口腔攝

2、入和尿排泄來維持。多項(xiàng)研究表明，1，5-AG不能被代謝;正常情況下，它從尿中排泄時(shí)，近99.9％由腎臟再吸收，并且其在再吸收時(shí)與葡萄糖共用一個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)體。當(dāng)出現(xiàn)高血糖狀況時(shí)，1，5-AG的再吸收會(huì)受到血糖的競爭性抑制，最終導(dǎo)致血清中其含量迅速降低。經(jīng)過治療后血糖恢復(fù)正常時(shí)，1，5-AG的再吸收得到恢復(fù)，血清中1，5-AG快速恢復(fù)到正常水平[4,5]?？梢岳?，5-AG監(jiān)測糖尿病，作為HbA1c的補(bǔ)充標(biāo)志物，同時(shí)也可作為近期的血糖控制和餐后

3、高血糖，或血糖波動(dòng)超出腎糖閾標(biāo)志。
　　目的：
　　本研究采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(UPLC-MS)，對(duì)1，5-AG的分析檢測展開研究:1、建立一種特異性好、分析時(shí)間短、靈敏度高的血清1，5-AG檢測分析方法，滿足臨床檢驗(yàn)或科研研究中大量樣本快速檢測的要求;2、將建好的方法應(yīng)用于糖尿病(diabetes mellitus，DM)、心血管疾病(cardiovascular diseases，CVD)以及妊娠糖尿病(ges

4、tational diabetes mellitus，GDM)患者血清1，5-AG檢測分析中，研究1，5-AG作為血糖監(jiān)測的標(biāo)志物進(jìn)行臨床檢驗(yàn)診斷的可行性，為糖尿病的預(yù)防及治療提供依據(jù)。
　　方法：
　　1、UPLC-MS檢測1，5-脫水葡萄糖醇方法的建立
　　本研究運(yùn)用特異性強(qiáng)、靈敏度高的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，采用ZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm，5μm，Agilent)色譜柱，對(duì)血清樣品的提取方法、

5、流動(dòng)相各組分比例、緩沖鹽的濃度以及質(zhì)譜檢測器各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，建立一種快速、靈敏檢測1，5-AG的UPLC-MS方法。
　　2、UPLC-MS檢測1，5-脫水葡萄糖醇方法的驗(yàn)證
　　在以牛血清白蛋白(BSA)為空白基質(zhì)中，對(duì)建立的方法進(jìn)行線性回歸、最低檢測限、最低定量下限(LLOQ)、準(zhǔn)確度、日間和日內(nèi)精密度、提取回收率及穩(wěn)定性等基本的方法學(xué)驗(yàn)證。
　　3、血清樣本中1，5-脫水葡萄糖醇的含量測定
　　以DM、C

6、VD以及GDM患者研究對(duì)象，將收集到的血清經(jīng)甲醇預(yù)處理脫蛋白后，上機(jī)檢測分析1，5-AG的含量差異。
　　結(jié)果：
　　1、通過優(yōu)化液相色譜及質(zhì)譜的各項(xiàng)條件、參數(shù)，成功建立了能快速測定血清1，5-AG的UPLC-MS方法，單個(gè)樣品運(yùn)行時(shí)間10 min，血清樣品預(yù)處理方法簡單。方法學(xué)考察結(jié)果表明:此方法具有較好的特異性，在0.1-50μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低定量下限為0.1μg/mL，日內(nèi)和日間精密度均在1.4％-10

7、.0％之間，準(zhǔn)確度在96.50％-101.3％之間，能滿足臨床或科研研究中大量樣本快速檢測的要求。
　　2、將上述建立好的UPLC-MS方法應(yīng)用于DM、CVD以及GDM患者血清中1，5-AG的測定，發(fā)現(xiàn)1，5-AG含量在患病者與正常對(duì)照組間具有明顯的差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　通過優(yōu)化液相色譜及質(zhì)譜的各項(xiàng)條件、參數(shù)，成功建立了能同時(shí)快速測定血清1，5-AG的UPLC-MS方法，該方法的特