干細(xì)胞再生因子Bmi-1及PCNA在惡懷黑素瘤中的表達(dá).pdf

1、背景：
　　 惡性黑素瘤（malignant melanoma, MM）是一種高度惡性的，起源于皮膚黑素細(xì)胞的腫瘤。它轉(zhuǎn)移早、死亡率高、手術(shù)后易復(fù)發(fā)、對(duì)化療藥物不敏感，且病因及機(jī)理不明。經(jīng)過數(shù)十年的研究，盡管惡黑病人的5年存活率及預(yù)后都有顯著提高，但其發(fā)病危險(xiǎn)系數(shù)及總體死亡率卻逐年上升，尤其在成人原發(fā)腫瘤中增加速度更快。惡性黑素瘤可以分為皮膚原發(fā)性黑素瘤(primary melanoma)和轉(zhuǎn)移性黑素瘤(metastatic m

2、elanoma)，也稱侵襲性黑素瘤。轉(zhuǎn)移性黑素瘤與皮膚原發(fā)性黑素瘤相比具有病程更短，治療效果更差的特點(diǎn)。
　　 多梳基因家族(Polycomb group，PcG)由多種與細(xì)胞周期和增殖相關(guān)的轉(zhuǎn)錄抑制子組成，是一個(gè)染色質(zhì)表觀遺傳修飾因子家族，最初是作為同源盒基因(Hox)的抑制因子被發(fā)現(xiàn)，其成員在參與造血、前后軸形成等生命過程中的主要功能是使其靶基因沉默。在維持干細(xì)胞的生理活性方面，PcG對(duì)部分分化和發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)抑制；在基因

3、的分化表達(dá)過程中，它們對(duì)不同靶基因進(jìn)行阻遏或去阻遏化。
　　 Bmi-1(B-cell specific moloney murine leukemia virus insertion site1)是多梳基因家族(Polycomb group，PcG)中的一員，其具有很強(qiáng)的自我更新能力，作為一種干細(xì)胞再生因子已經(jīng)證實(shí)在多種腫瘤干細(xì)胞(tumor stem cell，TSC)中表達(dá)異常增高。Bmi-1是1991年在荷蘭癌癥中心小鼠

4、淋巴瘤細(xì)胞中作為一種原癌基因被發(fā)現(xiàn)的。新近研究顯示Bmi-1做為干細(xì)胞再生因子在多種腫瘤的TSC中表達(dá)高于非TSC，而且將其敲除后，腫瘤的自我更新能力、腫瘤大小、細(xì)胞克隆能力，以及動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的移植成瘤性和傳代能力等均明顯下降。
　　 增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）是一種分子量為36KD的酸性蛋白，首先由Miyachi等[1]在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中發(fā)現(xiàn)并命名。

5、PCNA是真核細(xì)胞DNA合成所必需的輔酶，具有協(xié)調(diào)DNA復(fù)制、調(diào)控細(xì)胞周期等多種生物學(xué)功能，在調(diào)節(jié)DNA合成和細(xì)胞增殖方面起著重要作用。增殖旺盛的細(xì)胞中PCNA呈強(qiáng)陽性表達(dá)，而在靜止期細(xì)胞中為陰性表達(dá)，且其合成量與細(xì)胞增殖狀態(tài)成正相關(guān)，在細(xì)胞G1期開始升高，于S期達(dá)到峰值，M期降至最低點(diǎn)，與DNA的合成量曲線相一致。因此，可以通過監(jiān)測PCNA的量來間接反映局部細(xì)胞的增殖狀態(tài)，是細(xì)胞增殖的理想標(biāo)記物。目前，有關(guān)Bmi-1在MM中的表達(dá)及作

6、用機(jī)制尚不清楚。國內(nèi)外有關(guān)Bmi-1在MM中表達(dá)及意義的報(bào)道也十分罕見。為此，本研究采用免疫組化方法，對(duì)36例MM(皮膚原發(fā)性黑素瘤26例，轉(zhuǎn)移性黑素瘤10例)，30例皮內(nèi)痣，5例人黑素瘤A375細(xì)胞裸鼠移植瘤標(biāo)本中干細(xì)胞再生因子Bmi-1、PCNA的表達(dá)進(jìn)行檢測，以期探討B(tài)mi-1、PCNA與MM的臨床病理聯(lián)系。
　　 目的：
　　 探討干細(xì)胞再生因子Bmi-1及PCNA在惡性黑素瘤中的表達(dá)及臨床病理意義。
　　

7、 材料與方法：
　　 (1)收集從鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理中心2007年1月至2009年9月手術(shù)切除的標(biāo)本，其中惡性黑素瘤36例（26例皮膚原發(fā)性黑素瘤及10例轉(zhuǎn)移性黑素瘤）、皮內(nèi)痣30例。5例人黑素瘤A375細(xì)胞裸鼠移植瘤標(biāo)本來自河南省腫瘤病理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。
　　 (2)所有病理標(biāo)本均由兩位臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師確診。
　　 (3)免疫組化S-P法檢測36例MM，30例皮內(nèi)痣，5例A375裸鼠移植瘤中Bmi-1

8、及PCNA的表達(dá)。
　　 (4)數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)采用獨(dú)立多組二分類資料的卡方檢驗(yàn)、四格表Fisher精確概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理，2×2配對(duì)資料的相關(guān)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1．Bmi-1的表達(dá)
　　 Bmi-1蛋白在惡性黑素瘤、皮內(nèi)痣中的陽性率分別為61.11％、20.00％二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=11.323，P=0.001＜0.05），A

9、375細(xì)胞裸鼠移植瘤為100.00％；皮膚原發(fā)性黑素瘤和轉(zhuǎn)移性黑素瘤中的陽性率分別為57.31％、70.00％，二者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.460，P＞0.05）。
　　 2．PCNA的表達(dá)
　　 PCNA蛋白在惡性黑素瘤、皮內(nèi)痣中的陽性率分別為80.56％、10.00％，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=32.614，P＜0.001），A375細(xì)胞裸鼠移植瘤為100.00％；皮膚原發(fā)性黑素瘤和轉(zhuǎn)移性黑素瘤中的陽性

10、率分別為73.07％、100.00％，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=2.236，P＞0.05）
　　 3．Bmi-1與PCNA相關(guān)性分析
　　 惡性黑素瘤中，Bmi-1與PCNA蛋白陽性率呈顯著相關(guān)(x2=6.62，P=0.01，r=0.40)。
　　 4．Bmi-1陽性率與患者性別、年齡、病程的關(guān)系
　　 在惡性黑素瘤組織中，Bmi-1表達(dá)陽性率的高低與患者性別、年齡、病程無顯著相關(guān)性。（(r1=0.115，

11、r2=0.108，r3=0.205，P均＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1．人惡性黑素瘤及A375細(xì)胞裸鼠移植瘤中Bmi-1均高表達(dá)，提示Bmi-1可能介入了本病的發(fā)病過程。
　　 2．惡性黑素瘤中，Bmi-1與PCNA蛋白陽性率呈正相關(guān)，表明腫瘤組織中存在增生活躍細(xì)胞，可能與腫瘤干細(xì)胞的存在有關(guān)。
　　 3．皮膚原發(fā)性黑素瘤和轉(zhuǎn)移性黑素瘤中Bmi-1、PCNA的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示二者在原發(fā)