Bmi-1在肝癌組織中的表達及其與肝癌細胞侵襲遷移能力的影響.pdf

1、Bmi-1基因(BlymphomaMo-MLVinsertionregion1homolog,Bmi-1)屬于核染色質調控因子多梳基因(Polycombgroup,PcG)家族，直接參與細胞周期、凋亡和衰老的調控，為維持神經和造血干細胞的自我更新所必需，在胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用。近來，大量研究證實Bmi-1在許多腫瘤中表達失調，并且與腫瘤的侵襲轉移惡性表型和不良預后顯著相關。研究表明Bmi-1在原發(fā)性肝細胞肝癌(hepatocellut

2、arcarcinoma,HCC)中表達上調，但其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用卻存在較大的爭議。一些研究表明Bmi-1主要表達在早期和高分化肝癌中，Bmi-1的表達與肝癌的惡性進展無關。而另外一些研究表明Bmi-1主要表達在低分化肝癌中，Bmi-1的表達與肝癌的進展和侵襲惡性生物學行為密切相關。兩者的研究結果相互矛盾。為了研究Bmi-1是否與肝癌的侵襲轉移行為相關，設計并實施了如下實驗：
　　目的：檢測Bmi-1在肝癌組織中的表達情況。下

3、調Bmi-1在肝癌細胞中的表達，以探討其在肝癌細胞系MHCC97-H侵襲轉移中的作用，為肝癌的侵襲和轉移提供一個新的思路。
　　方法：采用免疫組織化學染色法檢測46例肝癌組織及對應的癌旁組織和16例正常肝組織標本中Bmi1基因的表達，并分析其與肝癌臨床指標之間的關系。設計并合成針對Bmi-1基因序列特異性的雙鏈小干擾RNA(Bmi-1-siRNA),轉染高轉移性人肝癌細胞株MHCC97-H,用流式細胞儀觀察轉染效率,熒光實時定量P

4、CR和Westernblot分別檢測Bmi-1基因的mRNA和蛋白表達水平;通過體外Transwell小室基質侵襲和遷移實驗,觀察Bmi-1表達沉默后對人肝癌細胞株MHCC97-H侵襲和遷移能力的影響。用熒光實時定量PCR檢測轉染前后E-鈣黏蛋白和PTEN基因mRNA水平的變化。
　　結果：免疫組化染色顯示Bmi-1在肝癌組織中高表達，Bmi-1的表達與肝癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理分期之間無明顯相關(P＞0.05)，但與腫

5、瘤的組織病理學分級有關，在低分化肝癌中的表達明顯高于在高分化肝癌中的表達(P＜0.05)。Bmi-1的表達有肝癌的門靜脈癌栓有關(P＜0.05)。將針對Bmi-1基因的小干擾RNA(Bmi-1-siRNA)轉染入高轉移性人肝癌細胞株MHCC97-H后，流式細胞儀顯示，轉染效率可達到91％。與空白組、對照siRNA組相比，實驗組Bmi-1-siRNA能有效抑制MHCC97-H細胞中Bmi-1基因的mRNA(F=56.199,P<0.05)

6、和蛋白表達水平。通過Transwell小室基質侵襲和遷移實驗，我們分析了不同組細胞的侵襲遷移能力。結果發(fā)現(xiàn)，與空白組、對照siRNA組相比，Bmi-1-siRNA轉染的MHCC97-H細胞穿透能力明顯降低(F=186.66,12.746,P<0.05)。并且，E-鈣黏蛋白和PTEN基因mRNA水平明顯升高。
　　結論：Bmi-1參與調控了肝癌的侵襲轉移過程。特異性的siRNA可以有效地干擾肝癌細胞中Bmi-1的表達。沉默Bmi-1