海洋源活性功能肽的制備、純化及性質(zhì)研究.pdf

1、本文以富含蛋白的扇貝裙邊為研究對(duì)象，研究了海洋抗氧化肽的制備方法和分離純化工藝，對(duì)純化的樣品進(jìn)行了氨基酸序列測定和功能基團(tuán)的分析，并對(duì)海洋抗氧化肽進(jìn)行體外活性研究，最后制備了海洋抗氧化肽的脂質(zhì)體。
　　 采用海洋堿性蛋白酶894酶解法制備抗氧化肽，研究了酶解溫度、pH值、酶解時(shí)間、加酶量和時(shí)間對(duì)酶解效果的影響；在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用L16(45)正交試驗(yàn)，根據(jù)Box-Behnken設(shè)計(jì)原理采用三因素三水平的響應(yīng)面分析法，對(duì)酶解

2、條件進(jìn)行優(yōu)化。最佳酶解條件為：固液比1:3.26，加酶量0.44％，溫度31.20℃，pH9.0，酶解1h，羥自由基清除率為83.78％，與預(yù)測值的相對(duì)誤差為0.29％，理論值與預(yù)測值基本一致，預(yù)測模型能較好地反映實(shí)際情況。
　　 經(jīng)過超濾、陰離子交換層析(Q Sepharose Fast Flow)、反相高效液相(KromasilC-18)和高效液相凝膠過濾層析(TSK-GEL G2000SW)，純化了扇貝裙邊酶解液中具有抗氧

3、化性的多肽，獲得兩個(gè)高純度的抗氧化活性肽SSP-1和SSP-2，并以MALDI-TOF-MS測定了其氨基酸序列。SSP-1分子量1544Da，氨基酸序列為Pro-Val-Asp-Lys-Asn-Ala-Gly-Val-Val-Gly-Ala-Pro-Pro-Lys-Arg-Gly：SSP-2分子量910Da，氨基酸序列為Arg-Gly-Gly-Arg-Gly-Ile-Thr-Asp-Tyr-Leu-Thr。將SSP-1和SSP-2與己知

4、活性肽進(jìn)行序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)抗氧化活性肽均為新的活性肽。最后對(duì)兩種肽的巰基、氨基、羧基及酪氨酸進(jìn)行了化學(xué)修飾，發(fā)現(xiàn)酪氨酸是SSP-2的活性必需基團(tuán)。
　　 對(duì)SSP-1的體外活性進(jìn)行了研究。SSP-1具有較強(qiáng)的還原能力和清除羥自由基的能力；SSP-1清除超氧陰離子的能力較高，且具有較高的抗雙氧水氧化的能力，因此認(rèn)為SSP-1具有較強(qiáng)的抗氧化活性。
　　 最后進(jìn)行了抗氧化肽脂質(zhì)體的制備研究。采用薄膜-超聲分散法，以包封率

5、為指標(biāo)，分別考察卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比、溫度、樣品濃度、pH、轉(zhuǎn)速和超聲時(shí)間對(duì)脂質(zhì)體的影響，在此基礎(chǔ)上采用L9(34)正交設(shè)計(jì)進(jìn)行優(yōu)化。制得的納米脂質(zhì)體為單室脂質(zhì)體，平均粒徑為255±60nm，包封率為(58.39±0.34)％，4℃下粒徑穩(wěn)定性無明顯變化?？寡趸闹|(zhì)體包封率和穩(wěn)定性較高，重現(xiàn)性好。
　　 本研究成果為抗氧化肽進(jìn)一步在功能性食品及化妝品領(lǐng)域中的應(yīng)用奠定了一定基礎(chǔ)，因而在經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和學(xué)術(shù)研究等方面將具有重要的意義