CD151-整合素α3β1-α6β1復(fù)合體對(duì)HUVEC黏附功能的影響及分子機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：通過(guò)將CD151及CD151-AAA194-196突變體基因轉(zhuǎn)入臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs),在體外細(xì)胞水平研究CD151及突變體基因?qū)?nèi)皮細(xì)胞黏附功能的影響及其分子機(jī)制。
　　研究方法：1.pAAV-CD151和pAAV-CD151-AAA194-196真核表達(dá)質(zhì)粒的篩選和提取。
　　2.培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,并隨機(jī)分為四組,分別用pAAV-GFP、pAAV-CD151和pAAV-CD151-AAA194-196

2、轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞,應(yīng)用細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CD151及其突變體對(duì)細(xì)胞-ECM的黏附影響,細(xì)胞聚集實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CD151及其突變體對(duì)細(xì)胞-細(xì)胞間黏附的影響;應(yīng)用免疫熒光染色觀察F-actin分布的變化;免疫共沉淀方法檢測(cè)CD151-整合素α3/α6復(fù)合體形成,WesternBlot檢測(cè)各組CD151、FAK、p-FAK-925、Rac1/2/3、Cdc42、p-Rac1/Cdc42、p-MLC及細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中蛋白R(shí)hoA的表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3、：1.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,WesternBlot顯示CD151及其突變體組CD151蛋白表達(dá)水平均高于Control組和GFP組(P<0.05),CD151-整合素α3β1復(fù)合體的形成在CD151組明顯高于Control組和GFP組,而突變體組復(fù)合體的形成被破壞(P<0.05);
　　2.與control組和GFP組相比,CD151組顯著增加了HUVEC細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)LN以及細(xì)胞-細(xì)胞間的黏附能力,而CD151-AAA194-196組細(xì)

4、胞的黏附能力明顯低于CD151組(P<0.05);CD151及其突變體基因能夠引起內(nèi)皮細(xì)胞F-actin重組;
　　3.CD151組p-FAK-925和p-Rac1/Cdc42的表達(dá)水平明顯高于其他三組,而CD151-AAA194-196組RhoA活性及p-MLC蛋白的水平明顯升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.成功將CD151及突變體基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi),并證實(shí)CD151細(xì)胞外大環(huán)上QRD194-196特異性位點(diǎn)對(duì)CD151-