人干擾素β在畢赤酵母中的表達(dá)純化活性測定以及人載脂蛋白ProApoA-Ⅰ在大腸桿菌系統(tǒng)中的表達(dá).pdf

1、密 級：分類號：0 9 3l y ▲Y 9 8 2 6 6 0單位代碼； 1 0 4 2 2學(xué) 號：2 0 0 3 1 1 3 6 0東’，系碩士學(xué)位論文論文題目：人干擾素B 在畢赤酵母中的表達(dá)純化活性測定以及人載脂蛋白P r o A p o A - I 在大腸桿菌系統(tǒng)中的表達(dá)作者姓名專 業(yè)指導(dǎo)教師姓名專業(yè)技術(shù)職務(wù)房俊強(qiáng)微生物王鵬教授2 0 0 6 年4 月1 8 日山東大學(xué)碩十學(xué)位論文摘要本論文包括兩個部分的工作，第一部分工作是人干擾

2、素B 在畢赤酵母中的表達(dá)、純化及活性檢測，第二部分工作是人載脂蛋白p r o A p o —I 在大腸桿菌系統(tǒng)中的表達(dá)。第一部分干擾素( I F N ) 是機(jī)體感染病毒時，宿主細(xì)胞通過抗病毒應(yīng)答反應(yīng)，產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)類似、功能相近的低分子蛋白。依照產(chǎn)生干擾素的細(xì)胞類型、干擾素的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性等方面的差異，可以將干擾素分為三種：即a 一、B 一和y 一干擾素；根據(jù)來源不同，也可以分為白細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和免疫細(xì)胞來源的干擾素。I F N

3、 一8 主要由成纖維細(xì)胞在細(xì)菌、病毒、多聚肌苷酸多聚胞苷酸( P o l yI C ) 、核苷酸等刺激物誘導(dǎo)下產(chǎn)生。干擾素作為一類具有廣泛生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，具有抗病毒繁殖、抗細(xì)胞分裂增殖和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的活性。目前國外已有多家機(jī)構(gòu)成功地在大腸桿菌、酵母和哺乳動物細(xì)胞中高效穩(wěn)定的表達(dá)干擾素一B ，用于多發(fā)性硬化癥、肝炎或其它病毒性感染的治療。我國干擾素研究起步較早，但主要集中在I F N —Q 和I F N —Y ，國內(nèi)鮮見I F N

4、—B 的研究。相對于原核表達(dá)體系，畢赤酵母表達(dá)體系的干擾素表達(dá)與人體白細(xì)胞中的產(chǎn)生過程極為相似，以天然的活性狀態(tài)將糖基化干擾素蛋白從酵母細(xì)胞中直接分泌到培養(yǎng)液中。本實(shí)驗中，通過分析干擾素蛋白的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)以及密碼子使用情況，采用定點(diǎn)突變的方法，P C R 引入兩個突變位點(diǎn)1 7C y s T G T ：：A G T S e r ，1 6 5 A r gC G A ：：A G AA r g ，獲得重組人干擾素B 基因，利用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)，