人LIGHT基因在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達(dá)研究.pdf

1、腫瘤壞死因子超家族成員可誘導(dǎo)多種生物學(xué)效應(yīng)，包括細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化以及死亡。其家族成員在炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)、對(duì)感染的免疫反應(yīng)以及組織的自穩(wěn)態(tài)中都起到了重要的作用。LIGHT是TNF家族具有特殊作用的成員之一，它不僅可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞凋亡，還可以共刺激T細(xì)胞活化并調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫應(yīng)答，有望用于腫瘤的免疫治療和一些自身免疫性疾病的研究。由于LIGHT在體內(nèi)含量低，提取和純化困難。為了滿足研究和臨床治療的需要，以基因工程方法制備重組的人LIGHT將是有

2、效的手段。本論文就LIGHT在原核和真核系統(tǒng)的表達(dá)情況進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。
　　 首先，構(gòu)建了人LIGHT胞外段融合蛋白的原核表達(dá)載體，在大腸桿菌中成功地表達(dá)了人LIGHT融合蛋白，并對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行了初步的優(yōu)化。
　　 其次，在優(yōu)化的條件下大量制備人LIGHT融合蛋白，通過(guò)親和層析進(jìn)行蛋白的分離純化。將純化蛋白與弗氏佐劑混合免疫小鼠，獲得了具有較高效價(jià)(1:128000)和良好特異性的鼠抗人LIGHT融合蛋白多克隆抗體。<

3、br>　　 最后，構(gòu)建了含有人LIGHT胞外段基因和Fc基因的酵母表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化畢赤酵母受體菌GS115，經(jīng)PCR和Western blot鑒定后獲得能穩(wěn)定分泌表達(dá)LIGHT-Fc融合蛋白酵母工程菌。
　　 本研究探索了人LIGHT在原核和真核系統(tǒng)中的表達(dá)情況，并制備了鼠抗人LIGHT多克隆抗體，其中，重組人LIGHT在畢赤酵母中的分泌表達(dá)屬國(guó)內(nèi)外首次報(bào)道。這為進(jìn)一步研究人LIGHT的功能及探索腫瘤的免疫治療新方法奠定了一定的