非小細(xì)胞肺癌中miR-486-5p對(duì)Pim-1基因表達(dá)調(diào)控的作用研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名私、葉導(dǎo)師擗于暫二級(jí)學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章：汕膨年弓月朔日河北醫(yī)科大學(xué)研究生

2、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫(xiě)，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：降毒11中新擗芍對(duì)Ⅻ拳年≥其礴日中文摘要非小細(xì)胞肺癌中miR4865p對(duì)Pim1基因表達(dá)調(diào)控的作用研究摘要目的：MicroRNA(miRNA)是一類22nt的非編碼RNA，主要通過(guò)嚴(yán)格或不嚴(yán)格堿基配對(duì)機(jī)制結(jié)合到所調(diào)控靶基因m

3、RNA的3lYrR(3’untranslationalregion)區(qū)，從而干擾mRNA穩(wěn)定性以及蛋白的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，發(fā)揮其對(duì)基因表達(dá)的負(fù)調(diào)控作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)miR4865p是人非小細(xì)胞肺癌(Non—Small—CellLungCancer，NSCLC)中最顯著低表達(dá)的miRNA之一，其在痰液和外周血中表達(dá)的變化對(duì)于NSCLC早期診斷具有重要臨床價(jià)值。此外，我們研究發(fā)現(xiàn)miR486—5p在肺癌中的作用為抑癌基因，它的低表達(dá)促進(jìn)肺癌的形

4、成及進(jìn)展過(guò)程，但是目前其作用機(jī)制尚不完全明了。本研究擬在前期研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討miR4865p作用的靶基因，為揭示其在NSCLC中的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方弦：首先利用生物軟件對(duì)miR4865p作用的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，之后通過(guò)構(gòu)建含有Pim1mRNA3’UTR區(qū)的報(bào)告基因載體，利用雙熒光素酶報(bào)告基因方法檢測(cè)miR486—5p對(duì)Pim1的調(diào)控作用。在此基礎(chǔ)上，在篩選獲得的穩(wěn)定表達(dá)miR486—5p的細(xì)胞株中，利用WestemBlot和Rea

5、ltimePCR方法檢測(cè)細(xì)胞中Pim1的表達(dá)情況。進(jìn)一步在24對(duì)人NSCLC腫瘤組織及配對(duì)的正常肺組織中檢測(cè)miR4865p和Pim1的表達(dá)情況。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，觀察miR4865p對(duì)Pim1表達(dá)的調(diào)控作用。結(jié)果：1生物軟件預(yù)測(cè)Pim一1可能為mi_R4865p作用的靶基因我們利用miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件miRecords及miRsearch對(duì)mi_R4865p所作用的靶基因進(jìn)行了分析。預(yù)測(cè)結(jié)果表明，在所有32853個(gè)預(yù)測(cè)基因中，Pim1