Salusinβ對大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響及對大鼠心臟蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、心血管疾病是威脅全人類健康的主要疾病之一，其發(fā)病與許多心血管活性物質(zhì)相關(guān)。Salusins是2003年發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性多肽，它包括28個(gè)氨基酸的Salusinα和20個(gè)氨基酸的Salusinβ兩種。目前的研究發(fā)現(xiàn)它們具有增加血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）內(nèi)鈣離子濃度及誘導(dǎo)myc、fos等基因表達(dá)、刺激VSMCs和成纖維細(xì)胞增殖的效應(yīng)，可以迅速且明顯地降低大鼠血壓與心率，同時(shí)也是心肌細(xì)胞生長和肥大的重要調(diào)節(jié)肽，具有抗心肌缺血再灌損傷和改善缺血再

2、灌后心功能的作用，并且有顯著的抗心肌細(xì)胞凋亡損傷效應(yīng)，對大鼠心臟還有負(fù)性變力和負(fù)性變時(shí)的調(diào)節(jié)作用。目前的研究對上述效應(yīng)的發(fā)生機(jī)制仍未明確，因此我們以Salusinβ為研究對象，從以下兩個(gè)部分展開研究，加深內(nèi)源性多肽Salusinβ對心血管系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用的認(rèn)識，尋找可能用于相關(guān)心血管疾病治療的靶標(biāo)，并為心血管疾病的臨床治療提供新的思路。
　　第一部分Salusinβ對大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響
　　研究目的
　　觀察Sa

3、lusin?對大鼠VSMCs中c-Fos、c-Jun和增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）表達(dá)的影響。
　　研究方法
　　將50只Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組，Salusinβ組和對照組，每組各25只，兩組在0.5h、1h、2h、4h和24h每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各5只大鼠。經(jīng)股靜脈向Salusinβ組大鼠體內(nèi)注射5nmol/kg的Salusin?，對照組注射同等量生理鹽水。分別于0.5h、1h、2h、4h和24h后用多聚甲醛灌注大鼠，取其胸主動(dòng)

4、脈。采用免疫組織化學(xué)和圖像分析方法，檢測兩組胸主動(dòng)脈血管環(huán)中0.5h、1h、2h和4hc-Fos、c-Jun蛋白的表達(dá)量，24小時(shí)PCNA的表達(dá)量。
　　研究結(jié)果：
　　1．c-Fos的表達(dá)情況：Salusinβ組的c-Fos表達(dá)量隨時(shí)間點(diǎn)逐漸增加，至2h達(dá)到峰值，隨后逐漸降低，至4h時(shí)降至對照組水平。0.5h與4h之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），0.5、4h分別與1、2h兩兩相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。對照組的c-

5、Fos表達(dá)量在各時(shí)間點(diǎn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。Salusinβ組的c-Fos表達(dá)量在0.5、4h時(shí)與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），在1、2h時(shí)則明顯高于對照組（P<0.01）。
　　2．c-Jun的表達(dá)情況：Salusinβ組的c-Jun表達(dá)量隨時(shí)間點(diǎn)逐漸增加，至2h達(dá)到峰值，隨后逐漸降低，至4h時(shí)降至略高于1h水平。0.5、1、2h和4h之間兩兩相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。對照組的c-Jun表達(dá)量在各時(shí)間點(diǎn)

6、無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。Salusinβ組的c-Jun表達(dá)量在0.5h時(shí)與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），在1、2、4h時(shí)則明顯高于對照組（P<0.01）。
　　3．24hSalusinβ組的PCNA表達(dá)量與對照組比明顯增高（P<0.01）。
　　研究結(jié)論
　　研究發(fā)現(xiàn)Salusin?能夠上調(diào)在體大鼠VSMCs中c-Fos、c-Jun和PCNA表達(dá)，從而提示Salusin?可能對血管平滑肌細(xì)胞有增殖作用。

7、
　　第二部分Salusinβ對大鼠心臟蛋白質(zhì)組學(xué)研究
　　研究目的
　　采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)，研究Salusin?作用24小時(shí)后的心肌組織蛋白質(zhì)組差異性表達(dá)，并對差異蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析，初步探討Salusin?產(chǎn)生心臟效應(yīng)的發(fā)生機(jī)制。
　　研究方法
　　將10只Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組，Salusinβ組和對照組，每組各5只。經(jīng)股靜脈向Salusinβ組大鼠體內(nèi)注射5nmol/kg的Salus

8、in?，對照組注射同等量生理鹽水。24h后斷頭處死大鼠。取部分左心室心肌組織，將每組心肌組織收集于同一個(gè)EP管中，提取左心室肌的總蛋白。蛋白樣品首先采用雙向凝膠電泳技術(shù)分離、凝膠染色、圖像掃描，然后使用ImageMaster2DPlatinum5.0software圖像軟件進(jìn)行差異分析，將差異蛋白點(diǎn)膠內(nèi)酶切后，點(diǎn)樣于不銹鋼板上，室溫自然干燥后在德國BrukerDaltonicsautoflexMALDI-TOF-MS型質(zhì)譜儀上進(jìn)行分析，

9、為提高分析結(jié)果，使用德國BrukerUltraflexIIITOF/TOF型質(zhì)譜儀進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析。最后用Mascot搜索引擎從SwissProt數(shù)據(jù)庫中嚙齒類目錄中完成質(zhì)譜分析的蛋白質(zhì)鑒定。
　　研究結(jié)果
　　對照組心肌2DE圖經(jīng)圖像分析后檢測到(1828.33土29.14)個(gè)蛋白點(diǎn)，Salusinβ組檢測到(1851.33土23.01)個(gè)蛋白點(diǎn)。圖像分析結(jié)果得到了12個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)，其中8個(gè)蛋白點(diǎn)在Salusinβ組在

10、顯著下調(diào)，4個(gè)蛋白點(diǎn)在Salusinβ組在顯著上調(diào)。采用MALDI-TOF-MS和MALDI-TOF/TOF對13個(gè)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行鑒定，最終鑒定出13個(gè)差異蛋白，它們分別涉及生物氧化、能量代謝、應(yīng)激、發(fā)育及與其他蛋白、離子結(jié)合等多種生物學(xué)過程。
　　研究結(jié)論
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Salusinβ產(chǎn)生心臟效應(yīng)可能與鑒定的13種蛋白在體內(nèi)參與的生物氧化、能量代謝、應(yīng)激、發(fā)育及與其他蛋白、離子結(jié)合等多種生物學(xué)過程相關(guān)，尤其與生物氧化關(guān)