骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)致敏小鼠造血干-祖細(xì)胞移植植入的影響及其相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：綜合評(píng)價(jià)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell，MSC)對(duì)致敏小鼠造血干/祖細(xì)胞移植植入的影響，先后進(jìn)行了一系列研究：包括首先對(duì)致敏小鼠骨髓MSC進(jìn)行體外培養(yǎng)后的形態(tài)學(xué)及功能評(píng)估，隨后是正常小鼠骨髓MSC在致敏小鼠體內(nèi)的歸巢示蹤實(shí)驗(yàn)，以及小鼠MSC/MSC培養(yǎng)上清液對(duì)致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖影響的體外實(shí)驗(yàn)，最后是利用不同組合的MSC聯(lián)合造血干/祖細(xì)胞移植，觀察MSC對(duì)致敏小鼠造血干/祖細(xì)胞移植中移入的影響的動(dòng)

2、物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。
　　 方法：應(yīng)用貼壁培養(yǎng)法進(jìn)行體外致敏/正常小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)，形態(tài)學(xué)觀察并利用流式法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞表面標(biāo)志，同時(shí)進(jìn)行成骨，成脂，成肌多向分化能力的檢測(cè)，全面對(duì)致敏和正常小鼠骨髓MSC的形態(tài)功能進(jìn)行對(duì)比評(píng)估；隨后應(yīng)用綠色熒光顏料(羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺，CSFE)體外標(biāo)志正常小鼠骨髓MSC后，經(jīng)尾靜脈注射到致敏小鼠體內(nèi)，分別利用冰凍切片及流式檢測(cè)法檢測(cè)在注射后6小時(shí)，24小時(shí)及48小時(shí)各主要臟器(包括外周

3、血，肝脾，骨髓，肺及腎等)標(biāo)志了熒光顏料的細(xì)胞分布情況，借此了解MSC在致敏小鼠體內(nèi)歸巢情況；最后進(jìn)行MSC對(duì)致敏小鼠造血干/祖細(xì)胞移植植入的影響實(shí)驗(yàn)，具體包括體外實(shí)驗(yàn)：應(yīng)用MTT法檢測(cè)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，了解MSC/MSC培養(yǎng)上清液對(duì)致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響；以及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分：不同組合的MSC干預(yù)設(shè)計(jì)，聯(lián)合致敏動(dòng)物的異基因造血干/祖細(xì)胞移植，在移植后進(jìn)行了相關(guān)觀察，其中包括生存分析，移植效果分析(包括血象改變，免疫功能的重建檢測(cè)，骨

4、髓細(xì)胞恢復(fù)及嵌合分析等)和移植物抗宿主病(graft versus host disease，GVHD)觀察，以便全面了解MSC對(duì)致敏動(dòng)物異基因造血干/祖細(xì)胞移植植入的影響。
　　 結(jié)果：致敏小鼠骨髓MSC與正常小鼠MSC比較，形態(tài)學(xué)及功能方面未見(jiàn)明顯異常；體外正常小鼠骨髓MSC經(jīng)尾靜脈注射進(jìn)入到致敏動(dòng)物體內(nèi)后很快并持久地在致敏小鼠的肝脾等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)聚集；體外實(shí)驗(yàn)表明，正常小鼠骨髓MSC在體外能很好地抑制致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖

5、，同時(shí)MSC培養(yǎng)上清液也能觀察到類似現(xiàn)象；但在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，在本課題設(shè)計(jì)下的MSC聯(lián)合應(yīng)用異基因造血干/祖細(xì)胞移植未能促進(jìn)2次異基因脾細(xì)胞注射的致敏動(dòng)物模型的異基因骨髓造血干/祖細(xì)胞移植的植入，未能延長(zhǎng)致敏動(dòng)物移植后的生存時(shí)間。
　　 結(jié)論：利用異基因脾細(xì)胞注射方式致敏的小鼠，其骨髓MSC與正常小鼠的比較未見(jiàn)明顯異常。外源性MSC能經(jīng)尾靜脈注射方式很快并持久地在致敏小鼠體內(nèi)引起致敏反應(yīng)的內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)如肝脾等靶器官聚集。MSC能在體