結(jié)核新疫苗保護力評價豚鼠模型的建立與重組結(jié)核疫苗(AEC-BC02)保護力評價.pdf

1、結(jié)核病(Tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)引起的一種古老而漫長的感染性疾病。世界衛(wèi)生組織(WHO)2014年全球結(jié)核報告2013年新發(fā)病例大約900萬，150萬人死于結(jié)核病。世界衛(wèi)生組織在卡介苗建議書中對卡介苗的定義是“目前唯一使用的預防結(jié)核病疫苗，可用于預防嬰幼兒結(jié)核性腦膜炎和播散型結(jié)核病，但是不能預防原發(fā)感染或阻止肺部潛伏的結(jié)核桿菌的復活，而后者是人群中分

2、枝桿菌傳播的主要來源”。因此，研究結(jié)核新疫苗更是顯得迫在眉睫，目前國內(nèi)外研制的結(jié)核新疫苗根據(jù)使用人群不同用途不同主要分為初免疫苗、初免加強型疫苗及潛伏感染預防用疫苗。
　　本研究主要針對上述三種疫苗（初免疫苗、初免加強型疫苗、潛伏感染預防用疫苗）建立相應疫苗保護力評價動物模型。第一部分建立了結(jié)核分枝桿菌初免疫苗保護力評價豚鼠模型并對重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)保護力進行評價;第二部分建立了結(jié)核分枝桿菌初免加強型疫苗保護力評價豚

3、鼠模型，包括短期評價（初免與加免間隔14周）和遠期評價（54周），并對重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)保護力進行評價;第三部分建立了結(jié)核分枝桿菌潛伏感染用疫苗保護力評價豚鼠模型，并且用重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)進行了驗證性評價，包括初次評價和再次評價。
　　一、初免疫苗動物評價模型建立與評價
　　本研究成功建立初免疫苗動物保護力評價模型，并且用重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)進行驗證，盡管顯示重組結(jié)核疫苗(AEC/BC

4、02)能一定程度抑制或殺滅結(jié)核分枝桿菌，降低豚鼠臟器的病變程度，減低脾臟的荷菌量，但仍不及我國卡介苗的預防保護效果，因此，重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)不適合作為初免疫苗。
　　二、初免加強型疫苗動物評價模型建立與評價
　　本研究成功建立的初免加強型結(jié)核疫苗保護力評價用動物模型，通過短期評價和遠期評價的比較，我們總結(jié)出BCG初免和重組結(jié)核疫苗加強免疫的間隔時間應該適當延長方可體現(xiàn)疫苗的有效性，其中主要原因是國內(nèi)BCG短期內(nèi)

5、的強有力的保護力使得重組疫苗的加強免疫效果在短期內(nèi)無法體現(xiàn)其免疫效果。實驗結(jié)果顯示:BCG接種54周后，卡介苗接種后重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)加強免疫組豚鼠的發(fā)病率、豚鼠肝脾肺綜合病變指數(shù)評分、脾菌分離數(shù)對數(shù)值、肺菌分離數(shù)對數(shù)值均低于單純BCG組，其中豚鼠肝脾肺綜合病變指數(shù)評分和肺菌分離數(shù)對數(shù)值與單純BCG組比較，差異有統(tǒng)計學意義。但BCG接種14周后加強免疫結(jié)果顯示加強免疫組和單純BCG組的比較沒有統(tǒng)計學差異，該結(jié)果提示重組結(jié)核

6、疫苗(AEC/BC02)對卡介苗接種后遠期加強免疫可顯著增強卡介苗的免疫效果。
　　三、潛伏感染用疫苗動物模型建立與評價
　　本文綜合了結(jié)核疫苗的臨床前研究，我們選擇了豚鼠作為模擬結(jié)核分枝桿菌的潛伏感染模型的模式動物。在首次評價中，我們優(yōu)化了動物模型，成功建立了結(jié)核分枝桿菌潛伏感染動物模型，并用凍干重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)進行驗證性評價。結(jié)果從肝脾肺綜合病變指數(shù)評分、脾Mtb分離、肺Mtb分離等多個指標的檢測結(jié)果綜合

7、分析，顯示凍干重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)可有效抑制或殺死豚鼠體內(nèi)潛伏感染的結(jié)核分枝桿菌、減輕豚鼠各臟器的病變程度，對結(jié)核分枝桿菌潛伏感染豚鼠可起到預防保護效果。再次評價中我們建立了相同于首次評價的動物模型，一方面驗證了模型的穩(wěn)定性，另一方面也驗證了重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)可有效抑制或殺死豚鼠體內(nèi)潛伏感染的結(jié)核分枝桿菌、減輕豚鼠各臟器的病變程度，對結(jié)核分枝桿菌潛伏感染豚鼠可起到預防保護效果;在免疫治療上選用重組結(jié)核疫苗(AE

8、C/BC02)6針組的預防保護效果優(yōu)于3針組。
　　四、結(jié)論
　　通過本研究我們成功建立了結(jié)核分枝桿菌潛伏感染保護力評價用豚鼠模型，初免加強結(jié)核疫苗評價用豚鼠模型和初免疫苗評價豚鼠模型。同時也通過結(jié)果證明重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)可以用于潛伏感染動物模型的預防性治療和用于BCG初免豚鼠的加強免疫，不適合用于初免疫苗替代現(xiàn)有BCG。
　　本文主要創(chuàng)新之處主要有以下三點:①通過初免模型的摸索，建立了一套規(guī)范化、標準化