人CD8+ 記憶性T細胞功能的表觀遺傳調節(jié)機制研究.pdf

1、記憶性CD8+T細胞相對于初始CD8+T細胞具有更強的免疫應答功能，表現(xiàn)為當遇到相同病原體的再次刺激時，它們可更快速產生效應性細胞因子如顆粒酶B（Granzyme B）、穿孔素（perforin,Pf）和IFN-γ等，更快速地增殖，從而迅速清除病原體，因此記憶性CD8+T細胞比初始CD8+T細胞能為機體提供更強的免疫保護功能。但是記憶性CD8+T細胞免疫功能增強的分子機制目前仍不清楚。
　　本研究中，我們首先分選出人外周血中的初始

2、和記憶性CD8+T細胞，并應用抗CD3/CD28抗體聯(lián)合刺激4 h和24 h以分別模擬TCR/共刺激信號介導的T細胞早期活化和晚期活化，并檢測初始和記憶性CD8+T細胞在靜息以及活化狀態(tài)下的基因表達譜。結果發(fā)現(xiàn)，初始和記憶性CD8+T細胞在靜息及活化后，僅有占總基因數5-10%的基因在兩群細胞間的表達差異倍數≥3倍。初始和記憶性CD8+T細胞所差異表達的基因中，約200個基因僅在活化后的記憶性CD8+T細胞中相對于靜息狀態(tài)表達水平明顯升

3、高，而在初始CD8+T細胞中其表達升高不明顯。通過Gene Ontology(GO)分析，這部分基因在免疫應答，細胞殺傷等功能上有顯著的富集。其中免疫應答相關的基因除了常規(guī)的CD8+T細胞效應性細胞因子，還包括很多輔助性T細胞分泌的細胞因子如Il9，Il17f和Il22等。
　　由于在活化后的記憶性CD8+T細胞中高表達的免疫應答相關功能基因與免疫記憶應答特征存在密切關系，于是我們選擇了在初始和記憶性CD8+T細胞之間差異較顯著的

4、一部分基因，并通過定量PCR，ELISA和流式細胞術驗證了它們的差異表達情況，同時選擇初始和記憶性CD8+T細胞表達水平接近的Il2作為對照。結果顯示，所有經定量PCR進行驗證的差異表達功能基因，如Ifng，Il17f，Il10等，其表達水平在活化后的記憶性CD8+T細胞中均顯著高于初始CD8+T細胞，而且ELISA和流式細胞術檢測到相應基因的蛋白表達水平在記憶性CD8+T細胞中也顯著高于初始CD8+T細胞。
　　我們進一步檢測了

5、重要基因位點組蛋白H3 K9K14的乙?；?。在Ifng基因啟動子靠近轉錄起始位點的區(qū)域，人記憶性CD8+T細胞組蛋白H3 K9K14的乙?；皆陟o息和活化狀態(tài)下均顯著高于初始CD8+T細胞，而Il2基因位點組蛋白H3的乙?；絼t沒有明顯差異。同時我們發(fā)現(xiàn)p300在記憶性CD8+T細胞中Ifng基因位點的富集程度高于初始CD8+T細胞，而Il2基因位點p300在活化后的初始和記憶性CD8+T細胞間的富集程度沒有差異。突變Ifng基因啟

6、動子區(qū)p300的結合位點則降低Ifng啟動子的轉錄活性。
　　我們還通過流式細胞術從單個細胞水平檢測了人初始和記憶性CD8+T細胞整體水平的組蛋白H3乙?；?。結果表明靜息狀態(tài)下初始CD8+T細胞整體水平組蛋白乙?；哂谟洃浶訡D8+T細胞，活化后初始和記憶性CD8+T細胞整體組蛋白乙?；奖褥o息狀態(tài)都有升高，但記憶性CD8+T細胞較初始CD8+T細胞升高更為顯著，使得活化后的初始和記憶性CD8+T細胞整體水平的組蛋白H3乙?；?/p>

7、平沒有顯著差異。與之對應，初始和記憶性CD8+T細胞之間所有組蛋白乙酰基轉移酶和組蛋白去乙?；傅谋磉_水平都沒有很大的差異。
　　綜上所述：人初始和記憶性CD8+T細胞無論是在靜息狀態(tài)，還是活化狀態(tài)，兩者在基因表達上都存在著差異。其中，和記憶性CD8+T細胞功能密切相關的Ifng基因在記憶性CD8+T細胞活化后顯著升高，并與其轉錄區(qū)組蛋白H3的乙酰化水平增高密切相關，而細胞整體水平的組蛋白乙?；诨罨蟮某跏己陀洃浶訡D8+T細胞