HCC患者中Tim-3-Galectin-9通路對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：通過健康志愿者和肝細(xì)胞性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)患者中Tim-3+Tregs和Tim-3+CD8+T細(xì)胞的頻率、表型和功能分析，探討Tim-3在HCC患者腫瘤局部的功能和臨床意義。
　　方法：分離健康人和HCC患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）及HCC患者肝組織浸潤的單個(gè)核細(xì)胞，流式檢測Tim-3+Treg細(xì)胞和Tim-3+CD8+T細(xì)胞頻率、表型及功能特征，免疫組化檢測Foxp3和Ga

2、lectin-9在肝組織內(nèi)的表達(dá)。
　　結(jié)果：CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞在HCC患者腫瘤局部高度聚集且上調(diào)表達(dá)共抑制分子Tim-3，Tim-3將CD4+Foxp3highTreg細(xì)胞分為兩群，Tim-3+CD4+Foxp3highTregs和Tim-3-CD4+Foxp3highTregs；CD4+Foxp3highTim-3+Treg細(xì)胞比CD4+Foxp3highTim-3-Treg細(xì)胞表達(dá)更高頻率的功能相關(guān)分子（CTL

3、A-4、GITR等）和細(xì)胞因子（IL-10、TGF-β），且CD4+Foxp3highTim-3+Treg細(xì)胞的頻率與腫瘤患者TNM分期呈正相關(guān)，提示Tim-3的上調(diào)表達(dá)加強(qiáng)了腫瘤局部Treg細(xì)胞的抑制功能。我們還發(fā)現(xiàn)HCC患者腫瘤局部浸潤C(jī)D8+T細(xì)胞也顯著上調(diào)表達(dá)Tim-3分子，且與Tim-3-CD8+T細(xì)胞相比，Tim-3+CD8+T細(xì)胞分泌功能細(xì)胞因子（IFN-γ,IL-2,TNF-α）和細(xì)胞毒相關(guān)分子（GramzymeB，pe

4、rforin）顯著降低，提示Tim-3的上調(diào)表達(dá)減弱了腫瘤患者局部CD8+T細(xì)胞的抗腫瘤作用。進(jìn)一步體外實(shí)驗(yàn)研究表明Tim-3的配體Galectin-9在體外可以誘導(dǎo)HCC患者外周血PBMC中Treg和CD8+T細(xì)胞上調(diào)表達(dá)Tim-3；同時(shí)免疫組化技術(shù)顯示HCC患者腫瘤局部高表達(dá)Galectin-9，免疫熒光顯示Galectin-9主要由CD68+細(xì)胞表達(dá)。
　　結(jié)論：HCC患者腫瘤局部聚集了大量抑制功能更加強(qiáng)大的CD4+Foxp