不同濃度泌乳素對(duì)葡萄膜炎患者外周血淋巴細(xì)胞增殖及活化的影響.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文不同濃度泌乳素對(duì)葡萄膜炎患者外周血淋巴細(xì)胞增殖及活化的影響姓名：蔣莉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：陳蕾2001.4.111例，3個(gè)月內(nèi)未使用免疫抑制劑，所有病例均為急性期。病程最短一周，最長(zhǎng)20余年。研究對(duì)象詳細(xì)資料見(jiàn)表1。46例正常對(duì)照，男28例，女18例，年齡在21一55歲，無(wú)眼部疾病及免疫內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。其中進(jìn)行活化和增殖檢測(cè)6例，男女各3例。實(shí)驗(yàn)方法1.血清泌乳素水平測(cè)定所有患者及正常對(duì)照者抽取

2、肘靜脈血2毫升，1500轉(zhuǎn)離心獲取血清，于一20℃保存待測(cè)。用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清泌乳素水平。2.PBMC的分離及培養(yǎng)無(wú)菌操作采肘靜脈血10毫升，利用標(biāo)準(zhǔn)的密度梯度離心法分離獲取單個(gè)核細(xì)胞，胎盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞后將PBMC以3x105孔種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，每孔加人200微升含10%FBS的RPM11640培養(yǎng)液。加人不同濃度的PRL12.5502001000n歲rnl同時(shí)加人SAg(150Wml)，培養(yǎng)108小時(shí)。以只加培養(yǎng)液或PHA(

3、5Rgml)或SAg的孔作為對(duì)照。3.SAg適宜濃度測(cè)定隨機(jī)取4例患者試以SAg濃度分別為501001502002501歲mlSAg以150N.grnl為最適濃度。4.sHTdR摻人實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖PBMC經(jīng)過(guò)SAg刺激96小時(shí)后，每孔加人0.5兩isHTdR12小時(shí)后收集細(xì)胞，加人5毫升閃爍液中，液閃儀測(cè)量1分鐘，以每分鐘脈沖數(shù)作為細(xì)胞增殖活性，此實(shí)驗(yàn)每種條件設(shè)3孔細(xì)胞平行比較取均值。5.雙標(biāo)記免疫熒光染色流式檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面抗原將培