嗜酸乳桿菌共軛亞油酸異構酶的純化與生物信息學分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、共軛亞油酸異構酶(L,inoleate isomerase，EC5.3.1.5)是在培養(yǎng)液中存在LA的前提下，某些微生物細胞菌體內誘導生成的一種胞內酶，是生物合成活性共軛亞油酸所必需的酶。嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)由于具有較強的抵抗胃酸和膽堿的能力，近年來逐漸被作為發(fā)酵劑用于酸奶的發(fā)酵中。同時，研究發(fā)現(xiàn)，該菌具有較高的共軛亞油酸異構酶活力。本文利用MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌，對共軛亞油酸異構酶的分離

2、純化進行了研究，并利用生物信息學手段對酶基因序列和酶蛋白的結構等進行初步分析。 實驗表明，LA對共軛亞油酸異構酶的誘導效果明顯好于其他誘導物，當每100mL培養(yǎng)基中添加10mg LA時，酶活力最高。并且在菌體進入對數(shù)生長期前就加入LA進行誘導最有利于產酶。 提取嗜酸乳桿菌共軛亞油酸異構酶粗酶液時，在抽提緩沖液pH值4.0，NaCl濃度0.2mol/L的條件下，可提高酶活力。在嗜酸乳桿菌共軛亞油酸異構酶的純化研究中，先

3、采用40％飽和度的硫酸銨進行鹽析，鹽析沉淀經透析脫鹽后，利用離子交換層析進行進一步的純化，最終得到的嗜酸乳桿菌共軛亞油酸異構酶比活力為177.70U/mg，共軛亞油酸異構酶的純化倍數(shù)為6.15倍。 本研究用生物信息學方法，對嗜酸乳桿菌(DQ239438)共軛亞油酸異構酶基因序列進行了分析，并對該基因序列所編碼的蛋白質進行了預測。酶基因序列全長1776bp，該序列中G+C含量為37.5％，雙鏈DNA分子量為1075.9kDa，共編

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