嗜酸乳桿菌共軛亞油酸異構(gòu)酶的純化與生物信息學(xué)分析.pdf

1、共軛亞油酸異構(gòu)酶(L,inoleate isomerase，EC5.3.1.5)是在培養(yǎng)液中存在LA的前提下，某些微生物細(xì)胞菌體內(nèi)誘導(dǎo)生成的一種胞內(nèi)酶，是生物合成活性共軛亞油酸所必需的酶。嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)由于具有較強(qiáng)的抵抗胃酸和膽堿的能力，近年來逐漸被作為發(fā)酵劑用于酸奶的發(fā)酵中。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)，該菌具有較高的共軛亞油酸異構(gòu)酶活力。本文利用MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌，對(duì)共軛亞油酸異構(gòu)酶的分離

2、純化進(jìn)行了研究，并利用生物信息學(xué)手段對(duì)酶基因序列和酶蛋白的結(jié)構(gòu)等進(jìn)行初步分析。 實(shí)驗(yàn)表明，LA對(duì)共軛亞油酸異構(gòu)酶的誘導(dǎo)效果明顯好于其他誘導(dǎo)物，當(dāng)每100mL培養(yǎng)基中添加10mg LA時(shí)，酶活力最高。并且在菌體進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期前就加入LA進(jìn)行誘導(dǎo)最有利于產(chǎn)酶。 提取嗜酸乳桿菌共軛亞油酸異構(gòu)酶粗酶液時(shí)，在抽提緩沖液pH值4.0，NaCl濃度0.2mol/L的條件下，可提高酶活力。在嗜酸乳桿菌共軛亞油酸異構(gòu)酶的純化研究中，先

3、采用40％飽和度的硫酸銨進(jìn)行鹽析，鹽析沉淀經(jīng)透析脫鹽后，利用離子交換層析進(jìn)行進(jìn)一步的純化，最終得到的嗜酸乳桿菌共軛亞油酸異構(gòu)酶比活力為177.70U/mg，共軛亞油酸異構(gòu)酶的純化倍數(shù)為6.15倍。 本研究用生物信息學(xué)方法，對(duì)嗜酸乳桿菌(DQ239438)共軛亞油酸異構(gòu)酶基因序列進(jìn)行了分析，并對(duì)該基因序列所編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行了預(yù)測(cè)。酶基因序列全長1776bp，該序列中G+C含量為37.5％，雙鏈DNA分子量為1075.9kDa，共編