人工輔助脫水在玻璃化冷凍小鼠囊胚中的應(yīng)用.pdf

1、本文研究目的：研究玻璃化冷凍小鼠囊胚及人工輔助脫水在玻璃化冷凍中應(yīng)用后，胚胎存活及繼續(xù)發(fā)育的能力，尋找玻璃化冷凍的具體方法，探討玻璃化冷凍方法的機(jī)制。為玻璃化冷凍技術(shù)應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。 研究方法：超排處理60只昆明小白鼠，出現(xiàn)陰道栓的51只小白鼠取出輸卵管及子宮，采集2-4細(xì)胞，放入10P液微滴盤進(jìn)行培養(yǎng)40-72h，在實(shí)體顯微鏡下觀察，選擇形態(tài)良好的囊胚進(jìn)行分組，共獲得250枚囊胚，隨機(jī)分成3組：對照組、單純冷凍組、輔助

2、脫水組。對照組：將2-3個(gè)發(fā)育良好的囊胚移入平衡液中平衡2分鐘，再將囊胚移入玻璃化冷凍液中快速清洗(25-30秒內(nèi)完成)，對胚胎不進(jìn)行冷凍處理，直接進(jìn)行解凍處理，后繼續(xù)培養(yǎng)，觀察胚胎孵出的能力。后兩組均采用兩步法玻璃化冷凍。單純冷凍組：將2-3個(gè)發(fā)育良好的囊胚移入平衡液中平衡2分鐘，再將囊胚移入玻璃化冷凍液中快速清洗(25-30秒內(nèi)完成)，迅速借助1ml注射器，按順序吸取冷凍液、空氣、含胚胎冷凍液、空氣、冷凍液，兩端用氣體柱封閉，直接投

3、入裝有液氮的泡沫盒子，并轉(zhuǎn)移入液氮罐中低溫冷凍保存。輔助脫水組：將2-3個(gè)發(fā)育良好的囊胚移入平衡液中人工輔助脫水直至囊胚腔消失(約10±4.5分鐘)繼續(xù)平衡2分鐘，以下步驟同單純冷凍組。三組的解凍方法一樣。分別觀察解凍后胚胎存活至囊胚孵出情況。 研究結(jié)果：對照組供試胚胎70枚，回收胚胎70枚，繼續(xù)培養(yǎng)存活60枚，孵出56枚。單純冷凍組供試胚胎86枚，回收胚胎84枚，解凍后存活的胚胎28枚，孵出15枚。輔助脫水組供試胚胎94枚，回

4、收胚胎90枚，解凍后存活的胚胎72枚，孵出41枚。 (1)存活率的比較：對照組、單純冷凍組、輔助脫水組存活率分別是85.7﹪、33.3﹪、80﹪。輔助脫水組和對照組存活率無差異(P＞0.05)，存活率相同，明顯高于單純冷凍組(P＜0.01)。 (2)孵出率的比較：對照組、單純冷凍組、輔助脫水組孵出率分別是80﹪、17.9﹪、45.6﹪。各組間比較均有差異(P＜0.01)。 研究結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了通過輔助脫水提高了