小鼠孵化囊胚和豬囊胚玻璃化冷凍保存技術的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中國農業(yè)大學碩士學位論文小鼠孵化囊胚和豬囊胚玻璃化冷凍保存技術的研究姓名：周崇申請學位級別：碩士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖學指導教師：朱士恩20030601ABSTRACTThetechniquesoncryopreservationofmouseandporcineexpandedblastocystsbyvitrificationwereinvestigatedinthisstudytopursuetheoptimalprotocol

2、forcryopreservationofporcineexpandedblastocystsTheexperimentswerecarriedoutasthefollowing：1)theeffectsofcryoprotectantstreatmentonthesurvivalofmouseexpandedblastocystsatroomtemperature，2)vitrificationofmouseexpandedblast

3、ocysts，3)thetoxictestofcryoprotectantstoporcineIVMoocytesandvitrificationofporcineparthenogeneticexpandedblastocystsThesurvivalratesinvitrowere100％afterthemouseexpandedblastocystswereexposedtomPBS，30％FicollandO5mol／Lsucr

4、oserespectivelyItindicatedthaithesechemicalswerenotoxicitytotheembryosAt25“Cthesurvivalratesinvitrodidnotdifferfromthatofthecontrolgroupafterthemouseexpandedblastocystsweretreatedin10％EGor10％EGand10％dimethylsulfoxide(DMS

5、O)forlessthan5rainaswellasinEFSorEDFSforO5min(pO05)Meanwhile，at37℃thesurvivalratedidn’tdifferfromthecontrolgroupeitherafterthemouseexpandedblastocystswereexposedto10％EGor10％EGand10％DMSOforlessthan20minaswellasinEFSorEDFS

6、for05min(pO05)TheresultsimpliedthatthepretreaimentsofabovesolutionspriortovitrificationwerenotharmfultothemouseexpandedblastocystsFurthermore，theresultsdemonstratedthatthetoxicityofvitrificationsolutionswasfromEGandDMSOa

7、ndthetoxicitywasincreasedwiththeconcentrationrising，equilibrationtimeextendingandthepretreatmenttemperatureelevatingThefrozenresultsofthemouseexpandedblastocystsbystrawwerecomparedtobyopenpulledstraw(oPs)Thesurvivalratew

8、as870％inthebestgroupof2stepmethodbystrawat25“(2Itwashigherthanthatoftheonestepmethodbystraw(744％)，butsignificantlylowerthanthatofthecontrol000％，p005)ThreemethodswereusedfordilutingthecryoprectantsfromtheembryosfrozeninED

9、FSorEFSafterthawingMethodA：theembryoswererinsedin05mol／LsucroseMethodB：theembryoswererinsedin05mol／Lsucrosefor2minthenin03mol幾SHCrosefor5minMethodC：theembryoswererinsedin03mol／Lsucrosefor5minthen015mol／Lsucrosefor2rainTh

10、eresultsshowedthatmethodCwasthebestwhentheembryoswerefrozeninEDFSThemethodCwasalsoeffectivefordilutingthecryoprotectantsfromtheembryofrozeninEDFS30bystraworOPSNosignificantdifierenceexistedinthreemethodswhentheembryoswer

11、efrozeninEFS133embryoscouldbeobtainedbystrawmethodat25“(2and154embryoscouldbeobtainedbyorsmethodat37‘CAndthentransferrespectivelyinto12and10pseudopregnantrecipientsfor3～4dsixestablishedpregnanciesTherateofdevelopedintoli

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