玻璃化冷凍技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分四種冷凍容器對(duì)人三原核卵裂期胚胎玻璃化冷凍的影響 目的：觀察開放型拉細(xì)麥管、閉合型拉細(xì)麥管、冷凍環(huán)和麥管四種冷凍容器對(duì)玻璃化凍融胚胎形態(tài)和功能的影響。 結(jié)論：Cryoloop對(duì)玻璃化凍融胚胎的形態(tài)和功能影響最小，CPS次之，OPS雖未獲得比Straw更高的形態(tài)存活率，但減輕了對(duì)胚胎的功能損傷。 第二部分氯化膽堿替代氯化鈉的磷酸鹽緩沖液和非滲透性冷凍保護(hù)劑海藻糖對(duì)胚胎玻璃化冷凍的影響 目的：觀察低N

2、a+磷酸鹽緩沖液(mPBS)和非滲透性冷凍保護(hù)劑海藻糖(Trehalose)對(duì)胚胎玻璃化冷凍的影響。 結(jié)論： 1、低Na+磷酸鹽緩沖液對(duì)玻璃化冷凍胚胎的功能影響小，更適于玻璃化冷凍胚胎。 2、D-(+)Trehalose與Sucrose相比，未能顯著增加凍融胚胎的存活率，亦未明顯減輕對(duì)胚胎功能的影響。 第三部分玻璃化冷凍胚胎的退化機(jī)制研究 目的：探討玻璃化冷凍胚胎的退化機(jī)制。 結(jié)論：LSC

3、M檢測到了玻璃化冷凍胚胎的△Ψm下降，而TUNEL法在玻璃化凍融胚胎中檢測到了DNA裂解片斷的存在，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察，證實(shí)了玻璃化冷凍胚胎通過細(xì)胞凋亡途徑退化。 第四部分激光掃描共聚焦顯微鏡結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)在玻璃化冷凍小鼠卵母細(xì)胞中的研究應(yīng)用 目的：建立一種觀察成熟卵母細(xì)胞紡錘體和染色體的方法，并用于觀察OPS玻璃化冷凍成熟(MⅡ期)卵母細(xì)胞的紡錘體和染色體變化 結(jié)論： 1、LSCM結(jié)合細(xì)胞免疫化學(xué)