陡脈沖電場(chǎng)對(duì)肝癌細(xì)胞殺傷效應(yīng)及機(jī)理研究.pdf

1、電脈沖治療癌癥是一種新的癌癥物理治療方法，本文用電脈沖對(duì)細(xì)胞施加不同時(shí)間的電刺激，通過凋亡試驗(yàn)，細(xì)胞膜穿孔，線粒體跨膜電位變化實(shí)驗(yàn)來證實(shí)電脈沖對(duì)腫瘤組織的有效殺傷和抑制作用，研究脈沖個(gè)數(shù)與細(xì)胞響應(yīng)的量效關(guān)系以及腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞對(duì)電場(chǎng)刺激的差異性響應(yīng)，得到以下結(jié)論：
　　 1.用Annexin V-FITC凋亡試劑盒和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)經(jīng)1KV/cm，100μs的電脈沖作用人肝細(xì)胞L02和人肝癌細(xì)胞HepG2在不同的作用時(shí)間點(diǎn)(8

2、s，15s，30s，60s)下的凋亡效應(yīng)。結(jié)果顯示，8s刺激時(shí)間不足以誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，而15s，30s，60s的刺激時(shí)間與對(duì)照組相比可以明顯的誘導(dǎo)HepG2凋亡，并且凋亡率隨刺激時(shí)增加而增大，說明延長(zhǎng)刺激時(shí)間可以增大腫瘤細(xì)胞的凋亡程度；另外，在刺激60s時(shí)，腫瘤細(xì)胞凋亡率是正常細(xì)胞的2倍，這表明腫瘤細(xì)胞比正常細(xì)胞對(duì)電脈沖的刺激更敏感。
　　 2.通過采用羅丹明123探針染色，用激光共聚焦顯微鏡實(shí)時(shí)觀測(cè)細(xì)胞的線粒體膜電位熒

3、光強(qiáng)度變化的實(shí)驗(yàn)研究，觀察到電刺激30s前細(xì)胞線粒體膜電位無明顯變化，而30后開始出現(xiàn)膜電位陡升后急劇降低的變化現(xiàn)象。由線粒體膜電位降低是凋亡早期現(xiàn)象的理論推測(cè)60s的作用時(shí)間能毀滅性的殺死腫瘤細(xì)胞，且電脈沖殺死細(xì)胞的線粒體膜電位變化為刺激中陡升后急劇降低，這是首次通過激光共聚焦顯微鏡觀測(cè)到線粒體膜電位升高再降低的有趣現(xiàn)象。
　　 3.通過PI探針染色，用倒置熒光顯微鏡實(shí)施觀測(cè)并拍攝熒光照片，發(fā)現(xiàn)電脈沖刺激8s后無明顯的穿孔現(xiàn)象