木犀草素體外抗乳腺癌作用與IGF-1通路和Era的關(guān)系.pdf

1、木犀草素(Luteolin)是從多種天然藥物、蔬菜果實(shí)中分離得到的一種有代表性的無毒的天然黃酮類化合物,藥理作用廣泛。近年來的研究表明,木犀草素對(duì)肝癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌、前列腺癌和乳腺癌等多種腫瘤有顯著抑制作用。隨著人們對(duì)木犀草素的抗腫瘤作用的研究日趨深入,發(fā)現(xiàn)其抗腫瘤機(jī)制主要與阻斷腫瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。
　　 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)控制著細(xì)胞的所有生命活動(dòng),參與細(xì)胞所有的生理和病理過程,細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)異常在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展各個(gè)階段

2、都具有重要的意義。近年來研究表明,胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(Insulin-like Growth Factor-1,IGF-1)介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路能參與腫瘤細(xì)胞凋亡調(diào)控,是癌基因及抑癌基因發(fā)揮生物活性的關(guān)鍵環(huán)節(jié),在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著十分關(guān)鍵的作用。IGF-1和IGF-1R在多種腫瘤組織和細(xì)胞中過度表達(dá),既能作為腫瘤發(fā)生和預(yù)后的診斷和治療標(biāo)記,也是一個(gè)具有廣泛應(yīng)用前景的腫瘤治療靶點(diǎn)。然而,細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路是一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),并非是一個(gè)個(gè)單

3、一的線性通路。近些年研究顯示,IGF-1信號(hào)通路與雌激素通路之間存在著相互關(guān)系,IGF-1通路的生物學(xué)作用會(huì)受到細(xì)胞內(nèi)雌激素受體α(Estrogen Receptorα,ERα)的調(diào)節(jié)。目前尚未有文獻(xiàn)系統(tǒng)報(bào)道木犀草素的抗乳腺癌作用與IGF-1通路和ERa之間的關(guān)系。因此,本研究以乳腺癌MCF-7細(xì)胞作為體外模型,對(duì)木犀草素體外抗乳腺癌活性進(jìn)行了測(cè)定,并對(duì)木犀草素體外抗乳腺癌作用與IGF-1通路和ERα之間的關(guān)系進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下:

4、
　　 1.采用(四甲基偶氮唑鹽)MTT比色法,對(duì)木犀草素體外抗乳腺癌活性進(jìn)行了研究,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示木犀草素能以時(shí)間和劑量依賴效應(yīng)顯著抑制MCF.7細(xì)胞的體外增殖。
　　 2.應(yīng)用流式細(xì)胞儀,對(duì)木犀草素誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果顯示木犀草素可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡,并可將MCF-7細(xì)胞周期阻滯于S期。
　　 3.利用MTT比色法和流式細(xì)胞儀,對(duì)木犀草素抑制IGF-1促細(xì)胞增殖和抗細(xì)胞凋亡作用進(jìn)行

5、了研究。結(jié)果顯示,外源性IGF-1能夠明顯促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的體外增殖并抑制其凋亡,而木犀草素能顯著抑制IGF-1誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞增殖和抗細(xì)胞凋亡作用。
　　 4.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和Western blotting方法,對(duì)木犀草素體外抗乳腺癌作用與IGF-1通路的關(guān)系進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示:木犀草素可顯著抑制內(nèi)源性IGF-1的分泌,并伴隨著對(duì)IGFBP-3分泌的促進(jìn)；木犀草素可使IGF-1R和Akt蛋白磷酸化

6、水平顯著下降,但對(duì)Erk1／2蛋白的磷酸化無明顯影響。說明木犀草素主要是通過抑制IGF-1介導(dǎo)的PI3K-Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng),促進(jìn)其凋亡。
　　 5.采用MTT比色法和Western blotting方法,對(duì)木犀草素抑制IGF-1誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞增殖作用與ERα蛋白表達(dá)之間的關(guān)系進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,木犀草素能顯著抑制IGF-1誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞增殖作用,其抑制作用與ERα蛋白表達(dá)有關(guān)。

7、r>　　 6.采用Western blotting方法,通過檢測(cè)加入雌激素受體抑制劑ICI182780和轉(zhuǎn)染質(zhì)粒ERα-siRNA前后木犀草素對(duì)IGF-1誘導(dǎo)的Akt蛋白磷酸化水平的抑制效果,來研究木犀草素通過干預(yù)IGF-1通路發(fā)揮的抗乳腺癌作用與ERα的關(guān)系。結(jié)果顯示,加入ICI182780和轉(zhuǎn)染質(zhì)粒ERα-siRNA前,與IGF-1組相比,木犀草素組的p-Akt蛋白表達(dá)水平顯著下降。而加入ICI182780和轉(zhuǎn)染質(zhì)粒ERα-siR