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文檔簡介
1、目的：建立一種簡便、靈敏和特異的檢測尿液Ki-67mRNA和UCA1mRNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，探討其對膀胱癌診斷的應(yīng)用價(jià)值。
方法：構(gòu)建包含Ki-67和UCA1基因目的片段的重組質(zhì)粒，以此為模板標(biāo)準(zhǔn)品，在熒光TaqMan的基礎(chǔ)上建立檢測Ki-67mRNA和UCA1mRNA的實(shí)時(shí)PCR方法，并進(jìn)行方法學(xué)評價(jià)（包括線性范圍、靈敏度、特異性、重復(fù)性）。以20例健康志愿者和25例非膀胱癌的泌尿系疾病患者作為對照組，用實(shí)時(shí)P
2、CR方法檢測45例對照組和48例膀胱癌組患者尿液Ki-67mRNA和UCA1mRNA的表達(dá)。
結(jié)果：成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEM-T-Ki-67和pGEM-T-UCA1，建立的實(shí)時(shí)PCR方法線性范圍較寬(102～108copies/μL)，重復(fù)性好（Ki-67和UCA1批內(nèi)變異系數(shù)為0.31％和1.23％；批間變異系數(shù)為1.16％和1.48％，均小于3％）。Ki-67和UCA1分別以Ct值為31.6和32.5為診斷閾值，兩者聯(lián)
3、合診斷的靈敏度和特異度分別為91.6％和86.6％，優(yōu)于單一標(biāo)志物的檢測（P＜0.05）。膀胱癌組Ki-67mRNA和UAC1mRNA高于非膀胱癌疾病組(P＜o(jì).05）和健康組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。膀胱癌組按病理分期分Tis/Ta、T1-2、T3-4三組，Ki-67mRNA和UAC1mRNA在Tis/Ta組低于T1-2組(P＜0.05）、T1-2組低于T3-4組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論：建立
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