腸缺血-再灌注損傷對中樞組織及外周血Leptin及Orexin-A水平的影響.pdf

1、該文通過在大鼠腸I-R損傷模型中檢測它們的蛋白質(zhì)及mRNA表達(dá)水平,探討它們所發(fā)揮的炎性介質(zhì)作用.主要的研究工作包括以下三個方面:一、建立大鼠腸I-R損傷模型和樣品的收集.1、大鼠隨機(jī)分成六組,每組9只,分別為假手術(shù)組(Sham)、缺血60 min再灌注30 min組(I60'R30')、I60'R90'組、I60'R150'組、I60'R240'組和I60'R360'組.麻醉后無菌條件下開腹并分離腸系膜上動脈,以微動脈夾夾閉60min

2、后松開,進(jìn)行再灌注.2、實(shí)驗(yàn)前行尾靜脈取血作自身對照,實(shí)驗(yàn)時行心臟抽血,分離血清和血漿,分別用于檢測Leptin和Orexin-A.抽血后立即取出左側(cè)附睪脂肪墊和下丘腦組織,用于提取Leptin和Orexin-A及其總RNA.二、腸I-R損傷對血清及脂肪組織Leptin水平的影響.1、采用該科室國內(nèi)首創(chuàng)的鼠類Leptin放免分析法及作者設(shè)計(jì)的調(diào)整法測量血清及脂肪組織的Leptin濃度,2、采用Western Blot法檢測脂肪組織Lep

3、tin水平.3、采用RT-PCR法檢測脂肪組織中Leptin mRNA表達(dá)水平.三、腸I-R損傷對血漿及下丘腦Orexin-A水平的影響.1、我們在國內(nèi)首創(chuàng)了人Orexin-A放射免疫分析法,由于人與大鼠的Orexin-A結(jié)構(gòu)一致,所以采用該放免法測量大鼠血漿及下丘腦的Orexin-A濃度.2、采用RT-PCR法檢測下丘腦Orexin-AmRNA表達(dá)水平.結(jié)果發(fā)現(xiàn):與損傷后Sham組相比,I60'R30'組、I60'R90'組Orexi

4、n-A mRNA水平逐步降低,I60'R150'組最低,I60'R240'組、I60'R360'組逐步回升.通過上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們發(fā)現(xiàn)Leptin和Orexin-A的水平在腸I-R損傷所致的能量代謝障礙中發(fā)生了一定的變化:隨著再灌注時間的延長,Leptin蛋白水平在中樞組織和外周血中呈對應(yīng)的波動式變化,Orexin-A蛋白水平在中樞組織和外周血中變化不顯著;同時,兩者的中樞組織mRNA表達(dá)水平都有顯著性變化,并且呈相反趨勢.因此,我們認(rèn)