異氟醚通過細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)對神經(jīng)干細(xì)胞存活、分化和增殖發(fā)揮雙向調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：研究全身麻醉藥物異氟醚對ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞存活、增殖和分化以及細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)的影響，探討鈣離子穩(wěn)態(tài)與異氟醚介導(dǎo)的ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞存活、增殖和分化作用的關(guān)系。
　　方法：將體外培養(yǎng)的ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞暴露于不同時間（6小時，12小時和24小時）、不同濃度的異氟醚（0.6％，1.2%和2.4%）、Xc（50nM，100nM，200nM和500nM）或丹曲林（10μM，20μM，50μ

2、M，100μM和200μM）后，測定LDH釋放的量和MTT的值，研究異氟醚、Xc和丹曲林對ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞損傷、存活的影響；暴露結(jié)束后，加入BrdU4小時，應(yīng)用免疫熒光顯微鏡，檢測BrdU陽性細(xì)胞數(shù)，研究異氟醚、Xc和丹曲林對ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞增殖活性的影響；藥物處理前，將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換為分化培養(yǎng)基，處理結(jié)束后繼續(xù)在分化培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)3天，然后應(yīng)用免疫熒光顯微鏡，檢測 Tuj1和GFAP陽性細(xì)胞數(shù)，研究異氟醚、X

3、c和丹曲林對ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞分化命運(yùn)的影響；應(yīng)用fura-2/AM雙波長合成指示劑法，測定細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，研究異氟醚對胞漿內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)的影響。
　　結(jié)果：異氟醚通過激活I(lǐng)nsP3受體和/或ryanodine受體可以誘導(dǎo) ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，2.4%異氟醚預(yù)處理1小時，可以部分消除異氟醚誘導(dǎo)的ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞胞漿內(nèi)鈣離子濃度增高。異氟醚呈劑量依賴性和時間依賴性誘導(dǎo) Re

4、Ncell CX人神經(jīng)干細(xì)胞損傷、抑制ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞存活、抑制ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞增殖和向神經(jīng)元方向分化、促進(jìn)ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化。InsP3受體拮抗劑Xc和ryanodine受體拮抗劑丹曲林單獨(dú)應(yīng)用時對ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞沒有明顯的損傷作用，不影響ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞分化命運(yùn)，但是Xc可以呈濃度依賴性抑制ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞存活和增殖，高濃

5、度丹曲林可以抑制ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞增殖。2.4%異氟醚短期暴露（1小時）預(yù)處理可以消除2.4%異氟醚長期暴露（24小時）誘導(dǎo)的ReNcell CX人神經(jīng)干細(xì)胞損傷、星形膠質(zhì)細(xì)胞分化增加以及對存活、增殖和向神經(jīng)元方向分化的抑制。InsP3受體拮抗劑 Xc以及 ryanodine受體拮抗劑丹曲林不但可以拮抗2.4%異氟醚暴露24小時誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用，而且可以拮抗2.4%異氟醚預(yù)處理誘導(dǎo)的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　結(jié)論：異氟醚