柑橘β-甘露聚糖酶基因的克隆及其在器官脫落過程中的表達(dá).pdf

1、β-甘露聚糖酶(endo-1,4-β-D-mannanendohydrolase:EC3.2.1.78)是降解植物細(xì)胞壁半纖維素重要成分--甘露聚糖的主要酶類。植物器官的脫落涉及細(xì)胞壁的降解和細(xì)胞壁水解酶活性的增加，但是β-甘露聚糖酶與器官脫落關(guān)系卻不明確。柑橘落花落果嚴(yán)重，明顯影響到柑橘產(chǎn)量的提高。本文以佛羅斯特臍橙（CitrussinensisOsbeck）為研究材料，通過研究柑橘花柄和果柄外植體在IAA和乙烯利處理下，β-甘露聚糖

2、酶在脫落器官離區(qū)中活性水平和基因水平上的表達(dá)模式，揭示β-甘露聚糖酶與脫落之間的關(guān)系，結(jié)果如下：
　　1.20-80mg/L的乙烯利或IAA可以在不同程度上加速或延緩柑橘花柄和果柄外植體的脫落進(jìn)程。比較脫落啟動時(shí)間和脫落速度，柑橘花柄和果柄分別以60mg/L和80mg/L的乙烯利處理促進(jìn)脫落效果最好，而80mg/L的IAA則對于延緩柑橘花柄和果柄外植體的脫落效果更明顯。
　　2.乙烯利或IAA在加速或延緩柑橘花柄和果柄外植體

3、脫落進(jìn)程中，各處理花柄外植體離區(qū)中β-甘露聚糖酶活性均呈現(xiàn)輕微降低趨勢，除處理后16h乙烯利處理中β-甘露聚糖酶活性明顯高于IAA和對照外，其它時(shí)間點(diǎn)處理間差異不顯著；各處理脫落進(jìn)程中，柑橘果柄外植體離區(qū)中β-甘露聚糖酶活性變化不明顯。
　　3.設(shè)計(jì)簡并引物，通過RT-PCR法在柑橘花柄離區(qū)克隆到β-甘露聚糖酶cDNA片段，命名為CiMan1，該片段長為274bp，編碼了91個(gè)氨基酸。序列分析表明，CiMan1與多種植物中的β-甘

4、露聚糖酶氨基酸同源性高達(dá)68％；聚類分析結(jié)果表明該基因與藍(lán)桉（EucalyptusglobulusLabill）MAN1和MAN2親緣關(guān)系最近。
　　4.設(shè)計(jì)特異引物，通過RT-PCR法在柑橘離區(qū)中擴(kuò)增出一條柑橘管家基因
　　ubiquitin的cDNA片段，該片段長286bp，編碼94個(gè)氨基酸序列。序列分析表明，柑橘ubiquitin與多種植物的ubiquitin氨基酸序列相似性均達(dá)到86％以上，可作為柑橘RT-PCR半定