經(jīng)前平顆粒對(duì)憤怒情緒反應(yīng)大鼠模型γ-氨基丁酸B2受體表達(dá)的影響及真核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、目的:研究憤怒情緒反應(yīng)模型大鼠頂區(qū)皮層、額區(qū)皮層、海馬和下丘腦中γ-氨基丁酸B2受體(GABABR2)mRNA及蛋白表達(dá)變化及經(jīng)前平顆粒對(duì)其表達(dá)水平的調(diào)節(jié)作用,探討憤怒反應(yīng)的發(fā)生和致病機(jī)理以及經(jīng)前平顆粒對(duì)憤怒反應(yīng)調(diào)節(jié)的微觀作用機(jī)制,并構(gòu)建GABABR2真核表達(dá)質(zhì)粒,為GABABR2轉(zhuǎn)染神經(jīng)元細(xì)胞提供物質(zhì)基礎(chǔ),同時(shí)為研究其下游信號(hào)通路做鋪墊。
　　方法:1、居住-入侵配合社會(huì)隔離慢性應(yīng)激法制備憤怒情緒反應(yīng)大鼠模型,調(diào)肝方藥經(jīng)前平顆粒

2、進(jìn)行藥物干預(yù),并作行為學(xué)評(píng)價(jià),逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)基因擴(kuò)增技術(shù)和蛋白免疫印跡技術(shù)(Western blot)分別檢測(cè)大鼠頂區(qū)皮層、額區(qū)皮層、海馬和下丘腦四個(gè)腦區(qū)GABABR2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　2、RT-PCR法擴(kuò)增GABABR2 cDNA,克隆入載體PMD18-T,然后酶切,定向克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-His-lacZ中,構(gòu)建pcDNA3.1-His-lacZ-GABABR2重組表達(dá)質(zhì)粒

3、,然后用限制性內(nèi)切酶和DNA測(cè)序鑒定。
　　結(jié)果:1、大鼠造模行為學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果顯示,與正常組大鼠相比,憤怒組大鼠均呈顯著性差異(P＜0.05),給藥后較正常對(duì)照組無(wú)顯著差異。RT-PCR結(jié)果顯示,與正常組相比,GABABR2 mRNA相對(duì)水平在憤怒組大鼠4個(gè)腦區(qū)均極顯著性下降(P＜0.01);與模型組相比,憤怒給藥組均發(fā)生極顯著性改善(P＜0.01),除額區(qū)皮層外均與正常組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Western blot結(jié)果顯示,與正常組相比

4、,GABABR2蛋白相對(duì)水平在憤怒組大鼠4個(gè)腦區(qū)均極顯著性下降(P＜0.01);與模型組相比,憤怒給藥組均發(fā)生顯著性改善(P＜0.05),與正常組無(wú)統(tǒng)計(jì)性差異。
　　2、經(jīng)測(cè)序鑒定GABABR2 cDNA序列正確,并經(jīng)酶切和DNA測(cè)序證實(shí)pcDNA3.1-His-lacZ-GABABR2重組質(zhì)粒構(gòu)建正確。
　　結(jié)論:采用居住-入侵造模法可以成功制備憤怒情緒反應(yīng)大鼠模型,憤怒反應(yīng)的發(fā)生和致病可能與頂區(qū)皮層、額區(qū)皮層、海馬和下丘