經(jīng)前平顆粒對憤怒情緒反應(yīng)大鼠模型γ-氨基丁酸B2受體表達的影響及真核表達載體的構(gòu)建.pdf

1、目的:研究憤怒情緒反應(yīng)模型大鼠頂區(qū)皮層、額區(qū)皮層、海馬和下丘腦中γ-氨基丁酸B2受體(GABABR2)mRNA及蛋白表達變化及經(jīng)前平顆粒對其表達水平的調(diào)節(jié)作用,探討憤怒反應(yīng)的發(fā)生和致病機理以及經(jīng)前平顆粒對憤怒反應(yīng)調(diào)節(jié)的微觀作用機制,并構(gòu)建GABABR2真核表達質(zhì)粒,為GABABR2轉(zhuǎn)染神經(jīng)元細胞提供物質(zhì)基礎(chǔ),同時為研究其下游信號通路做鋪墊。
　　方法:1、居住-入侵配合社會隔離慢性應(yīng)激法制備憤怒情緒反應(yīng)大鼠模型,調(diào)肝方藥經(jīng)前平顆粒

2、進行藥物干預(yù),并作行為學(xué)評價,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)基因擴增技術(shù)和蛋白免疫印跡技術(shù)(Western blot)分別檢測大鼠頂區(qū)皮層、額區(qū)皮層、海馬和下丘腦四個腦區(qū)GABABR2 mRNA和蛋白的表達水平。
　　2、RT-PCR法擴增GABABR2 cDNA,克隆入載體PMD18-T,然后酶切,定向克隆到真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-His-lacZ中,構(gòu)建pcDNA3.1-His-lacZ-GABABR2重組表達質(zhì)粒

3、,然后用限制性內(nèi)切酶和DNA測序鑒定。
　　結(jié)果:1、大鼠造模行為學(xué)評價結(jié)果顯示,與正常組大鼠相比,憤怒組大鼠均呈顯著性差異(P＜0.05),給藥后較正常對照組無顯著差異。RT-PCR結(jié)果顯示,與正常組相比,GABABR2 mRNA相對水平在憤怒組大鼠4個腦區(qū)均極顯著性下降(P＜0.01);與模型組相比,憤怒給藥組均發(fā)生極顯著性改善(P＜0.01),除額區(qū)皮層外均與正常組無統(tǒng)計學(xué)差異。Western blot結(jié)果顯示,與正常組相比

4、,GABABR2蛋白相對水平在憤怒組大鼠4個腦區(qū)均極顯著性下降(P＜0.01);與模型組相比,憤怒給藥組均發(fā)生顯著性改善(P＜0.05),與正常組無統(tǒng)計性差異。
　　2、經(jīng)測序鑒定GABABR2 cDNA序列正確,并經(jīng)酶切和DNA測序證實pcDNA3.1-His-lacZ-GABABR2重組質(zhì)粒構(gòu)建正確。
　　結(jié)論:采用居住-入侵造模法可以成功制備憤怒情緒反應(yīng)大鼠模型,憤怒反應(yīng)的發(fā)生和致病可能與頂區(qū)皮層、額區(qū)皮層、海馬和下丘