染色體9p21和ABCA1基因多態(tài)性與缺血性心腦血管疾病的關(guān)系研究.pdf

1、第一部分染色體9p21基因多態(tài)性與冠心病及缺血性卒中的關(guān)系研究
　　[背景]冠心病與卒中是世界范圍內(nèi)與腫瘤同列死亡率前位的復(fù)雜疾病，均由遺傳因素、環(huán)境及生活方式共同作用而致病，關(guān)于這兩種疾病的發(fā)病機(jī)制有相當(dāng)部分需要用遺傳背景來解釋。近年來全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)位于9p21的單核苷酸多態(tài)性(SNP)與冠心病的易感性相關(guān)，但多為歐美人群的研究或者后期的重復(fù)驗(yàn)證結(jié)果，缺乏中國(guó)漢族人群的資料，部分易感位點(diǎn)在中國(guó)漢族人群中尚未涉及。缺血性卒中

2、與冠心病在病因?qū)W和發(fā)病機(jī)制上有共同點(diǎn)，但9p21與缺血性卒中的研究尚無明確一致的結(jié)論，在中國(guó)漢族人群中亦缺少研究資料。
　　[目的]觀察9p21部分SNP在廣西漢族人群中的等位基因頻率與基因型分布，研究其與冠心病及缺血性卒中易感性的關(guān)聯(lián)。
　　[方法]本研究是基于廣西地區(qū)漢族群體的病例-對(duì)照研究，共收集樣本1675例，其中冠心病患者565例，缺血性卒中患者569例，正常對(duì)照541例。以調(diào)查問卷形式收集研究對(duì)象一般信息及臨床資

3、料，提取全血基因組DNA。選擇染色體9p21區(qū)域的3個(gè)標(biāo)簽SNP: rs1333040、rs4977574以及rs1333042，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法對(duì)樣本進(jìn)行三位點(diǎn)的基因分型，描述其基因型分布特征。建立遺傳模型分析單位點(diǎn)與冠心病以及缺血性卒中易感性的關(guān)聯(lián)，對(duì)顯著性強(qiáng)的關(guān)聯(lián)位點(diǎn)進(jìn)行分層分析以明確與已知危險(xiǎn)因素間是否存在交互作用。
　　[結(jié)果]在關(guān)于冠心病易感性的病例對(duì)照研究中，各SNPs基

4、因型及等位基因頻率分布在病例組與對(duì)照組中均處于遺傳平衡狀態(tài)，所選擇的樣本具有群體代表性。rs1333040、rs4977574和rs1333042 SNPs的基因型頻率分布在冠心病組與對(duì)照組中均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P值分別為0.035、0.006和0.021。其中rs4977574的P值經(jīng)Bonferroni法校正后為0.018; rs1333040在顯性模型(校正OR=1.79，95％CI=1.12-2.88)、共顯性模型(TT vs.CC

5、:校正OR=1.84，95％CI=1.13-3.01)下表現(xiàn)出與冠心病易感性的關(guān)聯(lián)。T等位基因表現(xiàn)出風(fēng)險(xiǎn)效應(yīng); rs4977574G等位基因在加性模型(校正OR=1.27，95％CI=1.06-1.53)、顯性模型（校正OR=1.52，95％CI=1.11-2.07）以及共顯性模型(GG vs.AA:校正OR=1.64，95％CI=1.14-2.37; AG vs.AA:校正OR=1.44，95％CI=1.04-2.02)中表現(xiàn)出冠心病

6、風(fēng)險(xiǎn)效應(yīng);而rs1333042 SNP與冠心病的關(guān)聯(lián)表現(xiàn)在加性模型（校正OR=1.27，95％CI=1.04-1.56）、顯性模型(校正OR=1.83，95％CI=1.16-2.89)以及共顯性模型（GG vs.AA:校正OR=1.92,95％CI=1.20-3.08; AG vs.AA:校正OR=1.73,95％CI=1.06-2.80)中。
　　分層分析顯示，rs4977574GG基因型的冠心病罹患風(fēng)險(xiǎn)更多的表現(xiàn)在男性、年齡＞

7、60歲、BMI＞24、非吸煙、非高血壓及非高脂血癥的個(gè)體中;且與年齡存在弱的交互作用(P=0.022)。
　　在9p21與缺血性卒中的研究中，僅rs4977574基因型頻率在對(duì)照和病例組的分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015)，P值經(jīng)Bonferroni法校正后仍顯著(P=0.045);單個(gè)SNP分析顯示，該SNP與缺血性卒中易感性有關(guān)，在加性(校正OR=1.27，95％CI=1.06-1.52)、顯性(校正OR=1.51，95％CI

8、=1.12-2.03)以及共顯性（GG vs.AA:校正OR=1.63，95％CI=1.14-2.33:AG vs.AA:校正OR=1.44，95％CI=1.05-1.98）遺傳模式中表現(xiàn)出風(fēng)險(xiǎn)效應(yīng)。
　　分層分析顯示，男性、年齡＞60歲、BMI＞24、以及不吸煙、不伴有高血壓、高脂血癥以及糖尿病的個(gè)體中，攜帶rs4977574GG基因型的個(gè)體較之AA基因型者有更高的缺血性卒中罹患風(fēng)險(xiǎn);但該位點(diǎn)與這些危險(xiǎn)因素之間并無交互作用。

9、r>　　[結(jié)論]本研究的結(jié)論表明，染色體9p21的基因多態(tài)性與廣西漢族人群冠心病和缺血性卒中的易感性有關(guān)。但與冠心病的關(guān)聯(lián)更顯著。
　　第二部分ABCA1基因多態(tài)性與冠心病及缺血性卒中的關(guān)系研究
　　[背景]除9p21外，人類9號(hào)染色體上的基因三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子1(ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1)編碼的蛋白參與人體內(nèi)脂質(zhì)代謝，與血漿脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)以及動(dòng)脈硬化發(fā)展相關(guān)，可影響冠

10、心病及缺血性卒中的易感性，但在不同人群中研究結(jié)論不十分一致。
　　[目的]探討ABCA1基因多態(tài)性與廣西漢族人群血脂水平以及冠心病及缺血性卒中易感性的關(guān)系。
　　[方法]本文采取兩階段的研究方法，第一階段采取分層抽樣的方法，選取646例健康漢族人DNA樣本，對(duì)ABCA1基因外顯子區(qū)以及啟動(dòng)子區(qū)的兩個(gè)標(biāo)簽SNPsrs2066715和rs2740483采用PCR-RFLP法進(jìn)行基因分型，并分析基因型與血脂水平的關(guān)系。隨后在第二階

11、段利用本文第一部分所描述的冠心病患者、缺血性卒中患者以及正常對(duì)照DNA樣本及臨床資料，對(duì)rs2066715和rs2740483 SNP進(jìn)行基因分型，驗(yàn)證正常對(duì)照組中基因型與血脂水平的關(guān)系，并分析其與冠心病及缺血性卒中易感性的相關(guān)性。
　　[結(jié)果]第一階段的研究結(jié)果顯示，rs2066715基因型與血清高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）和載脂蛋白(Apo) A1水平相關(guān)，A等位基因攜帶者中血清HDL-C和ApoA1水平較低（分別P=0

12、.023和0.027）;在男性中更顯著（分別P=0.029和0.049）。rs2740483基因型分布與血脂水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)。
　　在第二階段研究中，單SNP分析結(jié)果顯示，在正常對(duì)照組中，rs2066715基因型與血清HDL-C和ApoA1相關(guān)（分別P=0.002和0.004）;但無論是基因型頻率還是等位基因頻率在兩種疾病與對(duì)照中均無顯著性差異，在不同遺傳模型中進(jìn)一步分析顯示該SNP與冠心病及缺血性卒中的易感性無相關(guān)性(P＞0.0

13、5);而rs2740483等位基因和基因型頻率在冠心病與對(duì)照組的比較中均有差異（分別P=0.016和0.034）;校正傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素后，在加性(OR=0.74,95％CI=0.59-0.94)、共顯性(CC vs.GG: OR=0.43,95％CI=0.22-0.83)以及隱性模型(OR=0.46，95％CI=0.24-0.89)中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C等位基因?qū)谛牟【哂斜Ｗo(hù)效應(yīng)。在與缺血性卒中的關(guān)聯(lián)分析中，rs2740483等位基因及基

14、因型頻率在病例與對(duì)照中分布有差異，P＜0.001;在不同遺傳模型下也顯示，該SNP不僅在共顯性模型(CC vs.GG: OR=0.22,95％CI=0.10-0.49; GC vs.GG: OR=0.64,95％CI=0.48-0.89)、顯性模型(GC/CC vs.GG=0.58，95％CI=0.44-0.76)下表現(xiàn)出保護(hù)效應(yīng)，在隱性模型(OR=0.25，95％CI=0.11-0.56)以及加性模型(OR=0.58，95％CI=0.

15、46-0.73)中差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C等位基因攜帶者發(fā)生冠心病及缺血性卒中的風(fēng)險(xiǎn)較野生型攜帶者為低。
　　分層分析顯示，兩組研究中，rs2740483GC/CC的保護(hù)效應(yīng)在BMI＞24的人群中明顯。但僅在缺血性卒中組該位點(diǎn)表現(xiàn)出與BMI弱的交互作用。
　　[結(jié)論]以上研究結(jié)果表明:ABCA1基因部分多態(tài)性位點(diǎn)與正常人血脂水平相關(guān)，ABCA1 rs2740483與冠心病和缺血性卒中相關(guān)，攜帶野生型等位基因的個(gè)體有更高的罹患

16、風(fēng)險(xiǎn)。
　　第三部分染色體9p21和ABCA1基因多態(tài)性交互作用與冠心病及缺血性卒中易感性的關(guān)系
　　[背景]基因-基因交互作用在復(fù)雜疾病的發(fā)生中起重要作用。本部分在前期工作的基礎(chǔ)上，針對(duì)染色體9p21和ABCA1基因多態(tài)性與冠心病及缺血性卒中的關(guān)系進(jìn)行了基因-基因交互作用分析。
　　[目的]對(duì)9p21和ABCA1基因進(jìn)行交互作用分析，探討基因交互作用與冠心病和缺血性卒中易感性的關(guān)聯(lián)。
　　[方法]利用先前第一、

17、第二部分的基因分型結(jié)果以及臨床資料，運(yùn)用多因子降維法分別分析在冠心病和缺血性卒中兩種疾病中5個(gè)SNPs的交互作用，并建立邏輯回歸方程進(jìn)行驗(yàn)證。
　　[結(jié)果]預(yù)測(cè)冠心病風(fēng)險(xiǎn)的最佳兩因子模型是rs1333040和rs1333042，交叉驗(yàn)證一致性10/10，預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率56.6％;預(yù)測(cè)缺血性卒中的最佳模型亦為rs1333040和rs1333042組成的兩因子模型（交叉驗(yàn)證一致性10/10，預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率60.1％），由rs1333040、r