miRNA-146a多態(tài)性與心腦血管疾病的遺傳易感性的關(guān)系及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:心腦血管疾病包括動脈粥樣硬化、冠心病、高血壓、心衰和腦卒中等是全球范圍嚴(yán)重威脅人類健康、造成人類死亡最主要的因?yàn)?。心血管疾病雖然表現(xiàn)形式各異,但是發(fā)病過程有很多相似之處,而炎癥在這些疾病的發(fā)生發(fā)展中起非常重要的作用,且炎癥可能在心腦血管的基礎(chǔ)性疾病高血壓和動脈粥樣硬化互為風(fēng)險(xiǎn)因素中起橋梁和中介作用。微小RNA146a(microRNA146a,miR-146a)是一種與炎癥密切相關(guān)的MiR,LPS、IL-1和TNF-α等多種免

2、疫和炎癥相關(guān)因子均可以依賴NF-kB的方式促進(jìn)miR-146a的表達(dá)。miR-146a編碼基因存在導(dǎo)致miR-146a表達(dá)降低的功能性多態(tài)性rs2910164(C/G)多態(tài),且該多態(tài)性可導(dǎo)致miR-146a*G和miR-146a*C兩種不同miRNA的生成。miR-146a的多態(tài)性可能通過影響免疫炎癥過程,從而成為心腦血管疾病重要的候選基因。
　　 目的:通過病例-對照研究miR-146a的功能性SNP與冠心病、高血壓、心衰及缺

3、血性腦卒中遺傳易感性的關(guān)系,探討其可能的分子機(jī)制。
　　 方法:收集冠心病、原發(fā)性高血壓、心衰和缺血性腦卒中患者及對照人群血液標(biāo)本分別415例、173例、555例、268例和1010例。聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性對所有病例和正常對照組miR-146a rs2910164(G/C)多態(tài)性進(jìn)行基因分型。實(shí)時(shí)定量PCR測定正常對照和穩(wěn)定型心絞痛患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中miR-146a表達(dá)水平；ELISA法測定血清中I

4、L-5和TNF-α水平；分離培養(yǎng)健康志愿者PBMC,分別用TNF-α(10ng/mL)和氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)處理24小時(shí),實(shí)時(shí)定量PCR測定miR-146a表達(dá)變化情況；報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)對miR-146a的靶基因進(jìn)行鑒定。X2檢驗(yàn)比較病例和對照人群rs2910164多態(tài)性基因型和等位基因頻率分布的異同,非條件Logistic回歸分析評估rs2910164多態(tài)性與心腦血管疾病遺傳易感性間的相關(guān)關(guān)系；Kaplan-meier生

5、存分析法分析rs2910164多態(tài)性對心衰患者預(yù)后的影響。
　　 結(jié)果:正常健康人群中miR-146a rs2910164 CC、GC和GG基因型頻率分別為34.1％、45.0％和20.8％,長沙地區(qū)和?？诘貐^(qū)對照人群基因型分布無差異(p=0.646)；CAD病例組、EH病例組與正常組rs2910164多態(tài)基因型和等位基因頻率分布均無顯著差異(p>0.05)。在血脂正常的人群中,CAD病例組rs2910164 CC基因型頻率(3

6、9.1％)與對照組人群(33.9％)相比有升高的趨勢,盡管兩組間基因型分布無顯著差異(p=0.246)；心衰患者和缺血性腦卒中患者和與正常對照人群相比,rs2910164 G/C多態(tài)性基因型分布均有顯著差異(p分別為0.00019和0.010),與攜帶rs2910164 C等位的個(gè)體相比較,基因型為rs2910164 GG的個(gè)體患心衰患者和缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)均顯著增加(心衰OR=2.08,95％CI:1.474～2.941,p=0.

7、000032；缺血性腦卒中OR=1.250,95％CI:1.067～1.463,p=0.006)rs2910164 GG基因型心衰患者出院后6個(gè)月內(nèi)心衰復(fù)發(fā)率和再住院率均呈升高的趨勢,但不同基因型間心衰復(fù)發(fā)率和再住院率無顯著差異(p>0.05)；與對照人群相比較,CAD患者PBMC中miR-146a前體和成熟miR-146a表達(dá)水平均顯著降低(p分別為0.016和0.080);對CAD患者臨床分型進(jìn)行分組后,穩(wěn)定型心絞痛患者miR-14

8、6a前體和成熟miR-146a表達(dá)降低明顯(p均<0.05),不穩(wěn)定型心絞痛患者PBMC中miR-146a前體和成熟miR-146a表達(dá)有降低的趨勢,但與正常對照組相比無顯著差異；急性心肌梗死組患者PBMC中成熟miR-146a表達(dá)有升高的趨勢；10ng/mL TNF-α處理PBMC24小時(shí)可顯著上調(diào)miR-146a前體表達(dá)(p<.05),而100 mg/L ox-LDL處理PBMC24小時(shí)可顯著下調(diào)miR-146a前體表達(dá)(p<0.0

9、5)；與正常對照組相比較,冠心病患者血清IL-5的濃度顯著降低(p<.05),TNF-α的濃度顯著升高(p<.001)；病例和對照人群rs2910164多態(tài)性不同基因型間血漿IL-5和TNF-α的水平無顯著差異；與正常對照組相應(yīng)基因型相比較,rs2910164 CC基因型冠心病患者血清顯著TNF-α升高,IL-5水平顯著降低(p<0.05)。1nM濃度的miR-146a即可顯著降低pGL3-NOX4的報(bào)告基因活性(p<0.05),且mi

10、R-146a對該報(bào)告基因活性的抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性。
　　 結(jié)論:1)長沙地區(qū)和海口地區(qū)健康人群中miR-146a rs2910164多態(tài)性分布情況無地區(qū)差異；2)miR-146a rs2910164多態(tài)性與中國人群高血壓和總體冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性；3)miR-146ars2910164多態(tài)性與中國人群心衰和缺血性腦卒中的遺傳易感性相關(guān)；4)rs2910164 GG基因型心衰患者復(fù)發(fā)率和再住院率有升高的趨勢,但確切的結(jié)論有